[发明专利]一种基于pH值控制的高温厌氧菌生产乙醇的方法

权利要求书

1.一种基于pH值控制的高温厌氧菌生产乙醇的方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）划线培养：在温度为50~60℃条件下，将低温保存的嗜热严格厌氧革兰氏阳性菌Thermoanaerobacterium sp. Rx1置于固体培养基上进行厌氧培养48~60h得到Rx1单菌落，其中液体培养基为MM641培养基，固体培养基的pH值为6.0~8.0；

（2）纯化培养：将步骤（1）所得Rx1单菌落接种至液体培养基中，在温度为50~60℃条件下进行厌氧培养12~16h得到纯化Rx1菌种，其中液体培养基为MM641培养基，液体培养基的pH值为6.0~8.0；

（3）传代培养：将步骤（2）所得纯化Rx1菌种接种至液体培养基中，在温度为50~60℃条件下进行厌氧培养至菌体生长至对数期后期得到活化Rx1菌种，其中液体培养基为MM641培养基；

（4）乙醇发酵：将步骤（3）所得活化Rx1菌种接种至发酵液体培养基中，在温度为50~60℃、通入氮气或二氧化碳、pH值为6.00~8.00的条件下，发酵6~10h，然后在搅拌条件下继续发酵48~72h后终止发酵，其中发酵液体培养基为MM641培养基。

2.根据权利要求1所述基于pH值控制的高温厌氧菌生产乙醇的方法，其特征在于：所述MM641培养基配方包括碳源、氮源、NH₄Cl、MgCl₂·6H₂O、KH₂PO₄、K₂HPO₄、FeCl₃·6H₂O、刃天青、微量元素。

3.根据权利要求2所述基于pH值控制的高温厌氧菌生产乙醇的方法，其特征在于：微量元素包括Fe²⁺、Fe³⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、Co²⁺、Cu²⁺、Ni²⁺、Mo⁶⁺、B³⁺，碳源为葡萄糖、木糖、果糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、乳糖、麦芽糖、木聚糖、淀粉、果胶或纤维二糖；氮源为胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母提取物、水解乳蛋白、水解酪蛋白的一种或任意比多种。

4.根据权利要求3所述基于pH值控制的高温厌氧菌生产乙醇的方法，其特征在于：MM641培养基为5~10g/L碳源、2~5g/L氮源、0.6~1.0g/L NH₄Cl、0.4~1.0g/L MgCl₂·6H₂O、0.5~1.5g/L KH₂PO₄、1~4g/L K₂HPO₄、0.5~1.0g/L刃天青、5~10mmol/L Fe²⁺、8~12nmol/L Fe³⁺、0.4~0.6mmol/L Zn²⁺、0.4~0.6 mmol/L Mn²⁺、0.6~1.0 mmol/L Co²⁺、10~16 nmol/L Cu²⁺、0.08~0.2 mmol/L Ni²⁺、0.16~0.20 mmol/L Mo⁶⁺、0.08~0.2 mmol/L B³⁺。

5.根据权利要求1所述基于pH值控制的高温厌氧菌生产乙醇的方法，其特征在于：步骤（1）固体培养基为采用NaOH溶液调节MM641培养基的pH值为6.0~8.0，煮沸，加入0.5~1.0g/L半胱氨酸盐酸盐、2~4g植物凝胶，灭菌，凝固。

6.根据权利要求1所述基于pH值控制的高温厌氧菌生产乙醇的方法，其特征在于：发酵罐液体培养基为采用NaOH溶液调节MM641培养基的pH值为6.0~8.0，煮沸，加入0.5~1.0g/L半胱氨酸盐酸盐，灭菌，冷却至温度为50~60℃，通入氮气或二氧化碳，通气流量为10~30L/h。

7.根据权利要求1所述基于pH值控制的高温厌氧菌生产乙醇的方法，其特征在于：液体培养基为采用NaOH溶液调节MM641培养基的pH值为6.0~8.0，煮沸，加入0.5~1.0g/L半胱氨酸盐酸盐，通入氮气或二氧化碳，通气量为10~20L/h，冷却，灭菌。