[发明专利]一种多糖及其制备方法

说明书

本发明公开了一种多糖及其制备方法。本发明提供了一种制备多糖的方法，包括如下步骤：发酵嗜盐古菌Har.hispanic ATCC33960，得到多糖。所述发酵的条件为37℃至稳定期。本发明的实验证明了，这种来自极端嗜盐古菌的酸性多糖，其组成与已经报道的嗜盐古菌多糖都不尽相同，具有高硫酸根含量和高甘露糖含量的特点，且分子量大，在溶液中呈现出规则颗粒状，有很好的延展性。在嗜盐古菌中，该酸性多糖可以使菌落保持湿润状态，并且结合金属阳离子维持嗜盐古菌的细胞形态。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种多糖及其制备方法。

背景技术

微生物产生多糖来适应各种环境条件，胞外多糖可以帮助微生物生长，如粘附，存储营养，保护层，是形成生物被膜的重要组成组分。细菌产生的多糖，在许多领域具有非常广泛的应用价值，如作为抗氧化剂，金属螯合剂，乳化剂，增稠剂等。而极端古菌产生的多糖被研究与报道的并不多，嗜盐古菌的生存环境很极端，其产生的多糖，也许更具价值。目前报道的可以产生胞外多糖的几种嗜盐古菌有Haloferax、Halococcus、Haloarcula、Natronococcus、Haloterrigena和Halobacterium，只有五种来自嗜盐古菌的多糖，其组成与结构被报道，而关于嗜盐古菌多糖的生物合成途径，知之甚少。对于嗜盐古菌多糖及其生物合成途径的研究，可以丰富人类对古菌的认识，并且开发出更具价值的多糖。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种制备多糖的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：发酵嗜盐古菌Har.hispanic ATCC33960，得到多糖。

上述方法中，所述发酵的条件为37℃培养至稳定期。

上述方法中，在所述发酵后还包括如下步骤：

1)收集发酵产物的上清液，将上述上清液依次经乙醇沉淀、透析、浓缩、干燥，得到干燥产物；

2)将所述干燥产物依次经离子交换层析和凝胶层析，得到多糖。

上述方法中，所述透析采用截留量为8000-12000分子量的透析袋进行。

上述方法中，所述离子交换层析为将所述干燥产物溶解后，流进离子交换层析柱，再用离子交换层析洗脱缓冲液洗脱，收集离子交换层析产物；

所述离子交换层析洗脱缓冲液为含有0到2.5M NaCl的20mM NaAc水溶液；

所述离子交换层析洗脱的方式为梯度洗脱；

所述离子交换层析柱填充的介质为DEAE-Sepharose FastFlow(购自Sigma，体积为120mL，长30cm)；

所述离子交换层析柱体积为120mL，长30cm；

所述收集离子交换层析产物为收集NaCl浓度在含有1.25M-1.55M NaCl的20mMNaAc水溶液；

所述凝胶层析为将所述离子交换层析产物二次透析后，再流进凝胶柱，再用凝胶层析洗脱缓冲液洗脱，收集凝胶层析产物；

所述凝胶层析洗脱缓冲液为水，洗脱用量为150ml(1个柱体积)；

所述收集凝胶层析产物为收集2/15-1/3的柱体积的洗脱液(20-50ml)；

所述凝胶柱填充的介质为Sephacryl S-400(购自GE Healthcare，150mL，长100cm)；

所述凝胶柱体积为150mL，长100cm；

所述二次透析采用截留量为14000Da的透析袋进行。

由上述方法制备的多糖也是本发明保护的范围。