[发明专利]一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种利福昔明半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的利福昔明人工抗原为将式I所示的利福昔明半抗原与载体蛋白偶联所得的抗原。本发明所提供利福昔明人工抗原合成方法简单，纯度高和产率高，对于利福昔明抗体的制备，以及利福昔明药物残留检测具有重大价值。式I。

技术领域

本发明属于药物残留快速检测领域，涉及一种利福昔明人工抗原及其制备方法与应用。

背景技术

利福昔明( Rifaximin) 属于利福霉素类抗菌药物，是利福霉素的半合成衍生物，主要通过与细菌依赖DNA的RNA聚合酶中β-亚单位不可逆结合来抑制细菌RNA的合成，从而达到杀菌的目的。其对革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌、棒状杆菌等）和革兰氏阴性菌（如大肠杆菌等）均有良好的抗菌活性。

利福昔明在兽医上主要作为奶牛干乳期乳房注入剂，用于防治奶牛干乳期乳腺炎，由于效果良好而被广泛应用，欧盟规定利福昔明在牛奶中的残留标示物为原型药物，最高残留限量（MRL）为60μg/kg，我国兽药残留限量中尚无关于利福昔明残留限量的规定。

目前对于利福昔明残留检测方法的有液相色谱-质谱和质谱法，虽然这些方法特异性强、灵敏度高，但是操作繁琐、仪器昂贵，不适用于大批量样品的筛选检测。免疫化学分析鉴于在抗原抗体的定性定量方面独特的优势和操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大的优点弥补了理化分析的不足，在利福昔明的残留检测中起着越来越重要的作用。

影响免疫化学分析质量的根本因素是抗体的特异性与亲和性，这些性质又决定于免疫半抗原分子的结构，因此免疫半抗原的分子设计与合成是产生特异性抗体和建立小分子兽药残留快速检测技术的最基础、最关键的步骤。

发明内容

本发明的目的是提供一种利福昔明人工抗原及其制备方法与应用。

本发明所提供的利福昔明人工抗原是在利福昔明半抗原的基础上构建所得的抗原。

所述利福昔明半抗原属于本发明的保护范围，其结构如式I所示。

式I

本发明还提供了制备所述利福昔明半抗原的方法。

本发明所提供的制备所述利福昔明半抗原的方法，具体可包括如下步骤：

利福昔明原料药加入甲醇搅拌，而后加入2M氢氧化钠水溶液，所述利福昔明原料药、所述甲醇和所述氢氧化钠水溶液的配比为1500-1600 mg：25ml：2ml（如1572mg：15ml：2ml），所需反应温度为65-70℃（如65℃）反应1-2h（如1h），获得反应液。

20-24℃条件下用1M盐酸调pH值后将反应液滴加到冰水中，析出黄色固体，过滤，水洗，鼓风干燥，获得利福昔明水解中间体1339mg。其中，所述盐酸、所述冰水、所述水的配比为4-4.5ml： 45-50ml：10-12ml（如4-4.5ml：45ml：10ml）。所述鼓风干燥为50℃条件下鼓风干燥5-6小时。

将利福昔明水解中间体与琥珀酸酐按照质量比为1250-1339mg：200-220mg（如1330mg：210mg）的比例进行反应，减压蒸除所述吡啶，获得利福昔明琥珀酸酯半抗原1327mg。

其中，所述反应的温度具体可为75-80℃（如75℃），时间具体可为3-4h（如4h）。所述反应的催化剂和溶剂均为吡啶。

在所述“减压蒸除所述吡啶”后还可包括如下步骤：向残余物中加入水，析出黄色固体，过滤，水洗干燥，获得所述化合物，即利福昔明半抗原（式I）。其中，所述利福昔明水解中间体、所述吡啶、所述琥珀酸酐和所述水的配比为1250-1339 mg：15ml：200-220mg：20ml（如1300mg：15ml：210mg：20ml）。