[发明专利]一种樱草根组培繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组培培养，具体涉及一种樱草根组培繁殖方法。

背景技术

樱草(学名：Primula sieboldii E.Morren)报春花科报春花属多年生草本，根状茎倾斜或平卧，叶片卵状矩圆形至矩圆形，稀近圆形或截形，边缘圆齿状浅裂，上面深绿色，下面淡绿色，两面均被灰白色多细胞长柔毛，花葶高可达30厘米，伞形花序顶生，苞片线状披针形，花萼钟状，花冠紫红色至淡红色，稀白色，蒴果近球形，长约为花萼的一半。5月开花，6月结果。

樱草一般是种子繁殖，包括园艺品种也是，但种子繁殖容易发生变异，导致得到的新品种无法通过无性繁殖的方法保存下来，也没有有关樱草组培繁殖的报道。通过组织培养的方法，可以有效保存樱草园艺品种的优良性状，对樱草的大规模繁殖有重要意义。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种樱草根组培繁殖方法。该方法采用樱草的根部作来外植体进行组培，可减少对母株的伤害，降低外植体污染程度，并且可以有效提高樱草的不定芽形成率、愈伤组织形成率和发根率，从而提高增殖率。促进根端组培的增殖率，比用叶、茎组培有更高的增殖率。

技术方案：为了实现上述发明目的，如本发明所述一种樱草根组培繁殖方法，包括如下步骤：

(1)外植体的处理：切取樱草根部的细小根系作为外植体，剪切成长约1.5-1.6cm的根段，用洗衣粉的溶液搓洗后自来水冲洗；

(2)消毒处理：将去掉了表面灰尘和泥土的外植体放在超净工作台上消毒处理，先用酒精处理，再用升汞进行消毒处理，最后用无菌水冲洗，残留的水分用无菌滤纸吸取；将消毒完毕的外植体置于无菌纸上，剪去外植体的下端0.2-0.3cm，以免影响其从培养基中吸收养分，接种于组培培养基上；

(3)外植体的培养：将步骤(2)接种于组培培养基上的外植体置于培养室内进行组培繁殖，直到形成愈伤组织。

其中，步骤(1)所述用洗衣粉的溶液搓洗时间为2-3min，自来水流水冲洗时间为12-14h。

其中，步骤(2)所述酒精处理时间为30-45s，升汞进行消毒时间为4-5min，无菌水冲洗3-4次。步骤(2)所述组培培养基为MS+1mg/L 6-BA，加入蔗糖30g/L、琼脂7g/L，pH调整为5.7。培养基在温度121℃，15min灭菌处理。

其中，步骤(3)所述培养室的条件为光照16h/d，光照度为3000lx，温度控制在23-27℃，培养时间为28-30天。

本发明将消毒处理后外植体用剪刀、镊子剪去外植体的下端0.2cm，接种于MS培养基上，每处理接种20瓶，每个试瓶放5个外植体。每隔1d观察一次外植体的污染情况，培养17d后对外植体的污染率和成活率进行统计。筛选污染率低，成活率高的进行组培培养。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：1、本发明利用根进行樱草的组培，可避免伤害植株，比用叶、茎组培有更高的增殖率。通过本发明的这种方法有效保存新品种，可以大规模繁殖樱草，以供给市场。

2、本发明采用的组培培养基是最适合樱草繁殖的培养基，可以有效提高樱草的不定芽形成率达到100％、愈伤组织形成率到达100％和发根率最高达到93％，从而提高增殖率。

3、本发明利用根作为外植体，可以最大限度的降低对母株的伤害，降低外植体污染程度。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

组培培养基为MS+1mg/L 6-BA，加入蔗糖30g/L、琼脂7g/L，pH调整为5.7。

组培方法：

(1)外植体的处理：切取樱草根部的细小根系作为外植体，剪切成长约1.5cm的根段，放入白瓷缸中用加了少量洗衣粉的水搓洗2min，将泡沫淘洗干净后于自来水下流水冲洗12h；

(2)消毒处理：将去掉了表面灰尘和泥土的外植体放在超净工作台上消毒处理，先用体积分数75％酒精处理30s，再用1g·L^-1升汞进行消毒处理5min，最后用无菌水冲洗3次，残留的水分用无菌滤纸吸取；将消毒完毕的外植体置于无菌纸上，剪去外植体的下端0.2cm，以免影响其从培养基中吸收养分，接种于组培培养基上；

(3)外植体的培养：将步骤(2)接种于组培培养基上的外植体置于培养室内在光照16h/d，光照度为3000lx，温度控制在20℃进行组培繁殖，培养30天。