[发明专利]铁线莲亨利的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物栽培繁殖技术领域，具体涉及铁线莲亨利的组织培养方法。

背景技术

铁线莲隶属毛莨科(clematis fusca var.violacea)铁线莲属(Clematis.)，是一类观赏价值高、具有多种抗逆性的藤本植物。铁线莲属植物为多年生木质或草质藤本，少数为直立灌木。叶对生，有柄。单叶、三出复叶或羽状复叶，全缘、有锯齿或分裂。聚伞花序、圆锥花序或单生。铁线莲属植物花形新颖别致，变化大，花朵色泽调和，独具风采；花期较长，适应性强，并具有较强的耐寒性，在国际观赏园艺中占有重要地位。在追求花卉品种新、奇、特的今天，铁线莲属植物的观赏价值越来越受到国内外园艺界的重视。铁线莲种子繁殖率很低，扦插繁殖生根率也不高，利用组织培养和体胚发生是极具应用前景的途径，很多植物(如蝴蝶兰)利用组织培养得到大规模的生产，而对铁线莲的组织培养国内研究较少，发展速度相对滞后，严重影响了优良铁线莲品种的产业化发展。因此对铁线莲进行组织培养研究，探索高频率再生植株的形态发生途径和离体培养条件，用于指导种苗生产，同时也为研究铁线莲属植物离体再生规律提供一些资料，是十分必要的。

发明内容

发明目的：为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种繁殖周期短，繁殖系数高的铁线莲亨利Clematis‘Henryi’初代和继代组织培养方法。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了铁线莲亨利Clematis‘Henryi’的组织培养方法，包括以下步骤：

1)获取无菌苗材料：于春季剪取铁线莲亨利Clematis‘Henryi’新萌发的带芽茎段，自来水下冲洗60-120min后于超净工作台上，用体积浓度70～75％的乙醇浸泡15-20s，再用1％质量浓度的HgCl₂溶液浸泡5-10分钟后，用无菌水冲洗5-8次，吸干带芽茎段表面水分得到无菌处理的带芽茎段；

2)初代培养：取上述无菌处理后的带芽茎段，切成2cm长的小段，每段中部带1～2枚健康芽，发育饱满，无病虫危害状，切去两端与HgCl₂接触部分，上下各0.5cm茎段，余下1cm带芽茎段接于pH值为5.6-6.0的诱导培养基上，所述带芽茎段在诱导培养基诱导培养7天后开始产生丛生芽，继续培养4周后得到带有丛生芽的铁线莲；

3)增殖培养：带有丛生芽的铁线莲接种于pH值为5.8-6.2的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，增值培养30天，每日光照16h，增殖培养温度为24-26℃，光照强度为30-40μmol/m²s。

其中，上述步骤2)中的诱导培养基成分为1/4MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.02mg/LNAA+2％蔗糖+0.7％琼脂；pH值为5.8。

其中，上述步骤3)中的增殖培养基成分为1/4MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+3％蔗糖+0.7％琼脂+20％香蕉+0.1mgVc。

其中，上述步骤1)中的乙醇体积浓度70％。

其中，上述步骤3)中增殖培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m²s。

其中，上述MS为自行配制，配方如下：

大量元素(mg/l)：

NH4NO₃ 1650

KNO₃ 1900

CaCl₂·2H₂O440

MgSO₄·7H₂O 370

KH₂PO₄170

微量元素mg/l：

KI 0.83

H₃BO₃6.2

MnSO₄·4H₂O 22.3

ZnSO₄·7H₂O 8.6

Na₂MnO₄·2H₂O 0.25

CuSO₄·5H₂O 0.025

CoCl₂·6H₂O 0.025

铁盐mg/l：

FeSO₄·7H₂O27.8