[发明专利]一种竹节参花粉活力的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种花粉萌发能力的测定方法，特别是涉及一种用于竹节参的花粉萌发能力的测定方法。

背景技术

竹节参为五加科人参属多年生草本植物，别名竹根七、竹节人参等。以干燥根茎入药，具有滋补强壮、散瘀止痛、止血生肌、舒筋活络、和血祛痰等功效，是我国特有的珍贵中药材资源。

竹节参分布范围比较广，在我国主要分布于四川，湖北，云南，贵州，湖南，陕西，河南，江西等地，尤以贵州，四川和湖北最为集中。竹节参生长比较缓慢，每年生长一节，作为药用的竹节参生长年限一般在5年以上。上世纪七八十年代，竹节参野生资源还比较丰富，但是由于近些年来人们对其认知度的不断提升，一系列滥采乱挖的行为导致竹节参野生资源被严重破坏，其药用资源呈现濒危状态。

植物体中成熟的花粉包含着植物全部的遗传信息，花粉贮藏是有效利用和保存珍稀种质简捷、高效的途径。如何鉴定、收集具有高纯度和高生活力的花粉对保证竹节参的产量和质量具有至关重要的作用。

花粉活力是花粉细胞存活能力的指标，是花粉生物学特性研究中的一项重要内容，花粉活力的大小可以估测花粉授精和遗传后代的能力。花粉活力受自身遗传特性和外界因素的影响。现有技术对花粉活力的测定中，染色法测定时染色时间不易把握，且有时候颜色重叠，在显微镜下不易观察；形态学观察法虽然简单，但有些花粉形态正常，其实已经失去活力，统计起来也会有误差；花粉离体培养测定法是相对有效，接近实际结果的测定方法，但不同植物有着不同的离体萌发培养测定条件，还需要进一步摸索。目前，关于竹节参花粉活力的测定方法还未见报道。

发明内容

本发明要解决的问题是提供高效、快速、简便、低成本的测定竹节参花粉活力的方法。

本发明一种竹节参花粉活力的测定方法，其特征在于包含有以下步骤：

a.制备培养液，对其进行杀菌处理；

b.花粉采集：采集当天上午散粉的花粉，将所述花粉装入无菌离心管中，低温避光保存；

c.花粉培养：准备镊子、滤纸和培养皿，杀菌处理；用镊子将滤纸在培养液中充分浸湿，然后平展在培养皿中；将采集的花粉均匀的撒在滤纸上，在黑暗或自然光中培养30-60分钟；

d.镜检，计算萌发率，比较花粉管生长一致性。

优选的，一种竹节参花粉活力的测定方法，其特征在于包含有以下步骤：

a.制备培养液，对其进行杀菌处理，所述的培养液由质量浓度为15-20％的蔗糖、质量浓度为0.1-0.15％的硼酸、质量浓度为0.1-0.15％的氯化钙和水组成；所述的杀菌处理为将培养液在紫外灯下照射12-24小时；将离心管、镊子、滤纸和培养皿在121℃高温高压下灭菌20-30分钟；

b.花粉采集：采集当天上午散粉的花粉，将所述花粉装入无菌离心管中，低温避光保存；

c.花粉培养：准备镊子、滤纸和培养皿，杀菌处理；用镊子将滤纸在培养液中充分浸湿，然后平展在培养皿中；将采集的花粉均匀的撒在滤纸上，在黑暗或自然光中培养30-60分钟；

d.镜检，计算萌发率，比较花粉管生长一致性；以花粉管长度达到花粉粒直径的2倍及以上视为萌发，以萌发率≥80％视为花粉具有活力，适用于花粉活力测定；所述萌发率通过以下公式进行计算：萌发率(％)＝[(B1+B2+B3+B4+B5+B6+B7+B8)/A]×100％＝(B/A)×100％；式中，A为圆形培养皿的面积，B1-B8为镜检时圆形培养皿均分成8个区域内的每个区域内花粉萌发的面积；B为8个区域中花粉萌发的面积之和。

花粉萌发率是衡量花粉活力状况的主要标志，同时花粉管生长速度亦在一定程度上反映花粉的生活力状况。在人工授粉前鉴定花粉活力能够减少不必要的损失。本发明采用花粉离体萌发测定法检测花粉活性。

本发明一种竹节参花粉活力的测定方法具有如下有益效果：

1、采用本发明的竹节参花粉活力的测定方法，只需培养30-60分钟即可得到结果，一定程度上缩短了实验时间，该方法操作简单，更适用于实际的生产应用。

2、本发明的竹节参花粉活力的测定方法中，培养基质的配制简单易操作，相比其它人工、贵重微量元素等费用、成本低。

3、采用本发明的竹节参花粉活力的测定方法，可以实时观察，提前检测花粉活力，避免直接人工授粉后由于花粉活性的缺失而造成的经济损失。

具体实施方式