[发明专利]一种利用组织培养快速繁殖藏药柳茶的方法

权利要求书

1.一种利用组织培养快速繁殖藏药柳茶的方法，其特征在于：包括以下步骤，

1）外植体的选择与处理；

2）柳茶愈伤组织的诱导；

3）柳茶丛生芽的诱导与培养；

4)柳茶的生根培养；

5) 柳茶组培苗的移栽驯化；

步骤2）所述柳茶愈伤组织的诱导方法如下：

将制备好的柳茶嫩叶外植体切成大小为0.5cm的小块，转入已灭菌的MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA，pH值为 5.8的培养基上，置于温度20-25℃，光照时间12小时，光照强度为1500-2500lx的人工气候培养箱中进行培养，直至诱导形成愈伤组织；

步骤3）柳茶丛生芽的诱导与培养方法如下：

将步骤2）培养获得的呈绿色的嫩叶愈伤组织接种在配比为MS+ 1.0 mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA的丛生芽诱导培养基上进行培养，培养条件为：20～25℃条件下全暗培养7～14天，然后置于培养温度为20～25℃，每天光照10～12小时，光照强度为2000～3000lx的条件下培养直至形成丛生芽；

步骤4）所述柳茶的生根培养方法如下：

将步骤3)培养获得的丛生芽分切成单芽后接种到配比为1/2MS + 0.5mg/L NAA的生根培养基上进行生根培养，培养至生根；培养条件为：温度20～25℃，每天光照10～12小时，光照强度为3000～4000lx；

其中，采用以下组分的MS培养基：

硝酸钾1700-2100 mg/L、硝酸铵1450-1850 mg/L、硫酸镁150-190 mg/L、二水氯化钙350-390 mg/L、碘化钾420-460 mg/L、硼酸0.81-0.85 mg/L、硫酸锰6.0-6.4mg/L、硫酸锌20-24 mg/L、钼酸钠8.4-8.8 mg/L、硫酸铜0.23-0.27 mg/L、氯化钴0.023-0.027 mg/L、乙二胺四乙酸二钠35-39mg/L、硫酸亚铁25-30 mg/L、肌醇95-105 mg/L、甘氨酸1.8-2.2 mg/L、盐酸硫胺素0.08-0.12 mg/L、盐酸吡哆醇0.48-0.52mg/L、烟酸0.48-0.52 mg/L、蔗糖28000-32000 mg/L、琼脂6800-7200 mg/L。

2.根据权利要求1所述的利用组织培养快速繁殖藏药柳茶的方法，其特征在于，采用以下组分的MS培养基：

硝酸钾1900 mg/L、硝酸铵1650 mg/L、硫酸镁170 mg/L、二水氯化钙370 mg/L、碘化钾440 mg/L、硼酸0.83 mg/L、硫酸锰6.2 mg/L、硫酸锌22.3 mg/L、钼酸钠8.6 mg/L、硫酸铜0.25 mg/L、氯化钴0.025 mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3 mg/L、硫酸亚铁27.8 mg/L、肌醇100 mg/L、甘氨酸2 mg/L、盐酸硫胺素0.1 mg/L、盐酸吡哆醇0.5 mg/L、烟酸0.5 mg/L、蔗糖30000 mg/L、琼脂7000 mg/L。

3.根据权利要求1所述的利用组织培养快速繁殖藏药柳茶的方法，其特征在于：步骤1）所述外植体的选择与处理方法为：

选取5-7月份健康、强壮的野生柳茶植株，剪取其嫩叶作为外植体，用饱和的中性肥皂水浸泡20-30min；流水冲洗2-3小时后，移至超净工作台上用75%酒精消毒5-10s，无菌水冲洗4次；再用0.1%升汞消毒，然后用无菌水冲洗4-6次，每次冲洗时间2-3分钟，再用无菌滤纸吸干水分后，置无菌瓶中，备用。

4.根据权利要求1所述的利用组织培养快速繁殖藏药柳茶的方法，其特征在于：步骤5）所述柳茶组培苗的移栽驯化方法如下：

将步骤4）获得的生根柳茶组培苗先去掉瓶盖置于自然光照下炼苗5天后，将组培苗从培养瓶中取出，用蒸馏水洗掉根部的培养基，栽入腐殖土+蛙石、湿度为80%的基质上进行为期3-4周的移栽驯化并记录。

5.根据权利要求4所述的利用组织培养快速繁殖藏药柳茶的方法，其特征在于：所述腐殖土+蛙石的质量比为7:3。