[发明专利]一种采用近红外光谱法测定丹参药材中多成分含量的方法

权利要求书

1.一种采用近红外光谱法测定丹参药材中多成分含量的方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1：丹参药材粉碎后，过50目药材标准筛，混匀，密封备用；

步骤2：对步骤1的丹参药材进行近红外光谱测定；

步骤3：将得到的近红外光谱谱图代入已经建立好的丹参药材近红外光谱定量分析模型，计算丹参药材中丹参酮类成分，丹酚酸B，迷迭香酸和紫草酸的含量。

2.丹参药材近红外光谱定量分析模型的建立方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1：取多批次合格的丹参药材粉碎后，过50目药材标准筛，混匀，密封备用；

步骤2：采用高效液相色谱法测定步骤1丹参药材中的丹参酮类成分，丹酚酸B，迷迭香酸和紫草酸的含量作为对照值；

步骤3：采用近红外光谱法对步骤1的丹参药材进行采集：

步骤4：近红外光谱定量分析模型的建立

以丹参酮类成分，丹酚酸B，迷迭香酸和紫草酸的含量高低均匀选取样本组成校正集，建立校正模型；

剩余样本为验证集，对模型进行外部验证，保证校正集样本中指标成分的含量范围大于验证集；

以R²和RMSECV作为评价指标，对光谱预处理方法及建模波段进行优化；采用偏最小二乘法将校正集样本的近红外(NIR)光谱与其指标成分含量进行关联，分别建立丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸、丹参酮ⅡA+丹参酮Ⅰ+隐丹参酮的定量校正模型；采用留一交叉验证法，确定各模型主因子数；运用外部验证法对模型做检验和评价，符合后即得到定量分析模型。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述步骤2中，丹参酮类成分为丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮，它们的含量测定方法如下：

丹参药材中丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的含量测定依据2015年版《中国药典》一部丹参药材标准项下方法进行；其中色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18(200mmx4.6mm,5μm)；检测波长：270nm；柱温:20℃；流速：1ml/min；进样量:10μL；流动相：以乙睛为流动相A，0.02％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱(0～6min，61％A；6～20min，61％A→90％A；20～20.5min，90％A→61％A；20.5～25min，61％A)；

对照品溶液的制备

取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含20μg丹参酮IIA的溶液，即得；

供试品溶液的制备；

取本品粉末约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率140W，频率42KHZ)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述步骤2中，丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸的含量测定方法步骤如下：

1)色谱条件

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙睛和0.01-0.1％磷酸水溶液，体积比为20-25：75-80；流速：0.5-2.0ml/min；检测波长：250-300nm；柱温：15-25℃；洗脱时间：25-35min；进样量：10μL；外标法；

2)混合对照品溶液的制备

分别精密称取丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸对照品适量，加75％甲醇制成每1ml含丹酚酸B 0.504mg、迷迭香酸0.076mg、紫草酸0.201mg的对照品贮备液，备用；

分别精密量取上述3种对照品贮备液各适量，加甲醇制成每1ml含丹酚酸B100.848μg、迷迭香酸10.660μg、紫草酸8.042μg的混合对照品溶液；

3)供试品溶液的制备

取丹参药材粉末约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇-水溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用75％甲醇-水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，移至10ml容量瓶中，加75％甲醇-水溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。