[发明专利]一株DSE真菌及蓝莓组培苗快速菌根化的方法

权利要求书

1.一株DSE真菌，其特征在于所述菌株为R16，其分类命名为Tricladium splendens；该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCCNo.13885。

2.利用权利要求1所述DSE真菌与蓝莓组培苗快速高效菌根化的方法，其特征在于所述方法的具体步骤如下:

1）蓝莓苗的培养

选取生长状态良好，株高4-5cm的蓝莓组培苗进行快速繁殖，选取繁殖的高5-7cm生长状态良好的蓝莓组培苗进行生根培养；

2） DSE接种剂的制备

取斜面保存的菌种R16接入含有50 mL PDA培养液的250 mL三角瓶中，25-28 ℃，180-200 r/min震荡培养10天，制备种子液; 将种子液按体积比10%接入量接入到装有新鲜PDA培养液的三角瓶中，25-28 ℃，180-200 r/min震荡培养10-15天，备用；所用PDA培养液的成分及终浓度：质量比为0.6%马铃薯浸粉，质量比为2%葡萄糖，pH 5.6；高压灭菌；

3）共培养基质的准备

先将干苔藓剪短，用清水洗净，在蒸馏水中浸泡过夜，让其充分吸水，pH为5.5，再分装到组培瓶中，容器装量体积比为15%-25%，高压灭菌，备用；

4）DSE真菌与蓝莓共生体系的建立

将步骤1）制备的生长状态良好的生根蓝莓苗接入步骤3）制备的共培养基质中，再加入6-8 mL步骤2）制备的DSE接种剂，接种后，放至23-25℃，2000-3000lx的光强，光照时间8-16h/天条件下进行共培养；

5）共培养体系的检测

共培养一周后，在共培养基质中有明显的DSE菌丝的生长；30天后取出蓝莓苗，洗净根部，然后将根系剪成4-5cm长的根段将其放入提前配制好的FAA固定液中固定；12小时后，将蓝莓根段从 FAA 固定液中取出，冲洗后脱色，随机选取蓝莓根段，在显微镜下镜检观察深色有隔内生真菌的定殖情况，当部分根段看到深色有隔内生真菌的典型特征结构--微菌核时，表明深色有隔内生真菌-植物共生体系建立。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的脱色方法为经过10%(g/ml) KOH透明处理、质量比为10% H₂O₂漂白、质量比为1% HCl酸化、0.05% (g/ml)台盼蓝染色和体积比为50%甘油脱色。

4.一种包含权利要求1所述DSE真菌的发酵菌液的蓝莓促生长制剂。