[发明专利]一种鉴别荆条蜜与糖浆掺假荆条蜜的分析方法

权利要求书

1.一种筛选区别于糖浆的真荆条蜜标志性代谢物的方法，其特征是，包括以下步骤：

对荆条蜜样品与糖浆分别采用有机溶剂进行前处理后，应用超高效液相色谱-四极杆-轨道阱高分辨质谱方法实现对前处理后的样品中的化学成分的分离与测定，然后对得到荆条蜜样品与糖浆的UHPLC-MS原始数据进行预处理，最后应用多元统计分析方法主成分分析模型进行差异化合物筛选，确定和鉴定标志性代谢物；

超高效液相色谱条件为：采用十八烷基键合硅胶柱（C18柱）；流动相：A相：乙腈，B相：醋酸铵水溶液，梯度洗脱流程：0-2min 1% A, 2-3.25min 1%-5% A，3.25-4.25min 5% A,4.25-7.75min 5%-55% A, 7.75-9.75min 55%-90% A, 9.75-11.75min 90% A, 11.75-12min 90%-1% A, 12-15min 1% A；流速：0.2~0.5mL/min，柱温30~37℃；

所述糖浆包括大米糖浆、玉米糖浆、甜菜糖浆、复合果葡糖浆、网购蜂蜜专用糖浆或其它糖浆；

样品前处理中采用的有机溶剂是含有甲酸的甲醇和水的混合溶剂；

甲酸的体积分数为1%，甲醇和水为等体积混合形成混合溶剂；

将得到的荆条蜜样品与糖浆掺假荆条蜜样品的UHPLC-MS原始数据采用CompoundsDiscoverer软件进行预处理，该预处理是指对总离子流图原始数据中的色谱峰的提取、峰对齐、去噪音、未知物的检测处理，得到各个峰的保留时间、峰高、峰面积和质荷比数据；然后通过多元统计分析方法PCA得分图的形式对区分结果进行展示；

对筛选出来的潜在的标志性代谢物首先进行假阳性离子的排除，所述假阳性离子为返回总离子流图中提取不到色谱峰的物质；获得阳离子模式下的标志性代谢物信息，包括分子式，分子离子准确质量数以及保留时间，准确质量数的最大偏差在5ppm以内，保留时间偏差在0.2分钟内；同样的，根据获得的分子式，在阴离子模式下对潜在的标志性代谢物的分子离子进行提取，并根据阴阳离子模式下分子离子峰单位准确质量数对潜在的标志性代谢物进行推测，最终获得区别于糖浆的真荆条蜜标志性代谢物；

筛选得到的区别于大米糖浆的荆条蜜标志性代谢物有以下化合物组成：苯丙氨酸、亮氨酸、泛酸、对香豆酸、肉桂酸、白杨素、酪氨酸。

2.如权利要求1所述的分析方法，其特征是：将样品与有机溶剂混合至样品完全溶解，超声，离心，过有机滤膜，得到可上机检测的样品；其中，超声时间为10~30min；离心条件：800~1200rpm离心4~8min， 有机滤膜的孔径为0.20~0.25μm；样品与有机溶剂的添加比例为1g：（15~25）mL。

3.如权利要求2所述的分析方法，其特征是：1000 rpm离心5min，超声时间为25min，有机滤膜的孔径为0.22μm。

4.如权利要求1所述的分析方法，其特征是：所述醋酸铵水溶液的浓度为10 mM，流速为0.3mL/min，柱温35℃，进样量3微升。

5.如权利要求1所述的分析方法，其特征是：质谱条件为：分辨率，70000；鞘气流速，40个单位；辅助气流速，10个单位；反吹气流速，0个单位；喷雾电压，3.5kV；毛细管温度，320℃；辅助气温度，350℃；扫描范围，m/z：70-1050；扫描模式：全扫描。

6.如权利要求1所述的方法，其特征是：在获得载荷图时，通过设定Ratio＞20或＜0.5，P值＜0.01，来筛选潜在的标志性代谢物。

7.如权利要求1所述的方法，其特征是：在鉴定标志性代谢物时，通过四极杆-轨道阱高分辨质谱的二级质谱设定高能碰撞诱导裂解技术（HCD）的高能碰撞池三个能量级来寻找标志性代谢物的碎片离子，从而实现对荆条蜜样本标志性代谢物的鉴定分析。

8.权利要求1所述的区别于大米糖浆的荆条蜜标志性代谢物在鉴别大米糖浆掺假荆条蜜中的应用。