[发明专利]一种具有肿瘤细胞生物还原性微环境敏感的载药纳米胶囊及其制备方法

权利要求书

1.一种具有肿瘤细胞生物还原性微环境敏感的载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)胱胺结合的透明质酸的制备

将透明质酸溶于浓度为0.01mol/L，pH＝7.4的PBS溶液中，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑反应4-6h，然后加入胱胺二盐酸盐，室温下搅拌反应22-26h，透析、干燥得胱胺结合的透明质酸；其中透明质酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑和胱胺二盐酸盐的摩尔比为1:3:3:3；

(2)酯化胱胺结合的透明质酸的制备

将胱胺结合的透明质酸溶解于0.01mol/L，pH＝7.4的PBS和二甲基甲酰胺按体积比为4:1的混合液中，加入甲基丙烯酸缩水甘油酯和三乙胺，室温条件下搅拌反应14-15天，反应结束后，利用去离子水透析72h，然后加入二硫苏糖醇，室温条件下搅拌10-12h，接着用去离子水透析72h，最后冷冻干燥，制得侧链含烯键的酯化胱胺结合的透明质酸；其中胱胺结合的透明质酸、甲基丙烯酸缩水甘油酯、三乙胺和二硫苏糖醇的摩尔比为1:20:20:5；

(3)多功能化透明质酸的制备

利用2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯和β-丙内酯开环反应制备羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯单体，再加入溴化亚铜、1,1,4,7,10,10-六甲基三亚乙基四胺、2-(2-溴异丁氧基)甲基丙烯酸乙酯和侧链含烯键的酯化胱胺结合的透明质酸，油浴下反应20-24h，反应温度为60℃，制得侧链为羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯聚合物的巯基化透明质酸；其中酯化的胱胺结合的透明质酸上的烯键、羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯、溴化亚铜、1,1,4,7,10,10-六甲基三亚乙基四胺，2-(2-溴异丁氧基)甲基丙烯酸乙酯的摩尔比为1:10:2:4:1；

(4)氨基化叶酸的制备

将叶酸溶于二甲基亚砜，然后添加二环己基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，于50℃搅拌反应10-12h，向反应混合物中加入乙二胺和吡啶，室温搅拌反应10-14h；反应结束后，过滤，再用去离子水透析72h，最后冷冻干燥，制得；其中叶酸、二环己基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺、乙二胺和吡啶的摩尔比为1:1.2:2.0:10:0.001；

(5)载药纳米胶囊前体的制备

将溶解有活性物质的有机溶剂与溶解有多功能化透明质酸的PBS溶液按体积比为1:20混合，在超声探头作用下，利用超声乳化法制备纳米胶囊，将得到的乳液置于黑暗环境下挥发除去有机溶剂，再利用去离子水透析，最后冷冻干燥，制得载药纳米胶囊前体；其中活性物质和多功能化透明质酸的质量比为1:2.5；PBS溶液的浓度为0.01mol/L，pH＝7.4；其中，活性物质为阿霉素；

(6)具有肿瘤细胞生物还原性微环境敏感的载药纳米胶囊的制备

将载药纳米胶囊前体分散于浓度为0.01mol/L，pH＝7.4的PBS溶液中，加入二环己基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，室温搅拌反应4-6h，然后加入氨基化叶酸，室温搅拌反应12-14h，再利用去离子水透析纯化，最后冷冻干燥，制得；其中载药纳米胶囊前体外围羧基、二环己基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺、氨基化叶酸的摩尔比为1:1.2:2.0:10:0.2。

2.根据权利要求1所述的具有肿瘤细胞生物还原性微环境敏感的载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，羧酸甜菜碱甲基丙烯酸酯单体的制备方法为：

①将2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯溶于无水丙酮中，使2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯的浓度为0.2mol/L；

②氮气保护下，将β-丙内酯溶于无水丙酮中，使β-丙内酯的浓度为1.2mol/L；

③将步骤②所得溶液滴加到步骤①所得溶液中反应4-6h，反应温度为10℃；其中2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯和β-丙内酯的摩尔比为1:1.2；滴加时间控制在15min之内；

④反应结束后，用无水丙酮沉淀产物，然后再用无水丙酮和无水乙醚洗涤，真空干燥，制得。

3.根据权利要求1所述的具有肿瘤细胞生物还原性微环境敏感的载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(5)中有机溶剂为苯、甲苯、氯仿、环己烷、二氯甲烷或三氯甲烷。

4.根据权利要求3所述的具有肿瘤细胞生物还原性微环境敏感的载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，有机溶剂为三氯甲烷或二氯甲烷。

5.如权利要求1-4任一项方法制备得到的具有肿瘤细胞生物还原性微环境敏感的载药纳米胶囊。