[发明专利]一种真菌拟盘多毛孢提取物及其应用

说明书

本发明涉及一种真菌拟盘多毛孢提取物及其应用，属于应用微生物学领域。真菌拟盘多毛孢提取物经真菌菌株选择、及拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)GLGS‑5提取物的制备步骤得到。其真菌菌株是拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)GLGS‑5,菌株GLGS‑5已于2017年1月9日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.13577。真菌拟盘多毛孢提取物在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂应用。本发明的有益效果在于：拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)GLGS‑5固体发酵提取物活性好，对AChE抑制率达61.8％，能够作为制备乙酰胆碱酯酶抑制剂应用。

技术领域:

本发明涉及一种真菌拟盘多毛孢提取物及其应用，属于应用微生物学领域。

背景技术:

阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD)，又称老年性痴呆症，是中枢神经系统，起病隐袭的神经变异性疾病，表现为一种慢性进行性过程，是常见的与年龄相关的疾病之一。继心血管疾病，癌症和中风之后，AD成为威胁老年人健康的又一大杀手锏，给病患带来极大的痛苦，也给患者家庭和社会带来非常沉重的负担。而在老年性痴呆症发病机制研究中，胆碱能缺失学说认为老年性痴呆症患者大脑内神经递质—乙酰胆碱的缺失是导致AD疾病的关键原因。缺乏乙酰胆碱导致AD患者认知功能下降，记忆力减退。乙酰胆碱酯酶是一个关键的生物神经传导酶，执行神经传导的重要功能。同时它是治疗AD的一个目标靶点，乙酰胆碱酯酶抑制剂可以明显改善和缓解AD病人的症状，也是临床上治疗阿尔茨海默症最有效的药物之一。因此寻找乙酰胆碱酯酶抑制剂是治疗该病的重要来源之一。

经文献检索，未发现与本发明内容相同文献的公开报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种真菌拟盘多毛孢提取物及其应用。

本发明是这样实现的：

1.本发明使用的真菌菌株是拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)GLGS-5,菌株GLGS-5已于2017年1月9日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCCNo.13577。

2.拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)GLGS-5提取物的制备

培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)为常规培养基。培养基的组成和配制方法如下:

马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：马铃薯200g切成小块加水煮沸半小时后，过滤取滤液用自来水定容至1L，加入葡萄糖20g和琼脂20g，121℃灭菌20分钟。

用PDA培养基，在25℃对真菌拟盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)GLGS-5进行固体培养20天后，将平板上的培养基连同菌体一起切成均匀小块放入锥形瓶中，用乙酸乙酯:甲醇:乙酸＝80:15:5(V/V/V)混合溶剂浸泡提取，浸泡3d后过滤，重复提取3次，合并过滤后的上清液，采用旋转蒸发仪蒸干后得粗提物，4℃保存备用。

3.乙酰胆碱酯酶抑制活性测定方法

a.乙酰胆碱酯酶(AChE)溶液的配制:500U的乙酰胆碱酯酶被溶解于5mL无菌水中，即得100U/mL的酶溶液。100U/mL的酶液用pH＝8.0的PBS稀释成0.1U/mL的酶液供Ellman法使用。

0.1M的Na₂HPO₄溶液：称取Na₂HPO₄·12H₂O共3.58g加水溶解至100mL。