[发明专利]采用反相高效液相色谱法分离手性对映体的方法及羟丙基‑β‑环糊精的应用

说明书

技术领域

本发明属于手性对映体的分离技术领域，特别是涉及一种采用反相高效液相色谱法分离手性对映体的方法，以及一种羟丙基-β-环糊精的应用。

背景技术

手性分子又称手性对映体，是化学中结构上镜像对称而又不能完全重合的分子，具有两种分子结构。具有不同分子结构的两种手性分子除旋光性存在差异外，物理性质相同，化学性质可能相似，因此使用常规的高效液相色谱法无法实现两种手性分子的分离。但是由于具有不同分子结构的两种手性分子在生物活性及药理作用等方面往往存在较大差别，甚至作用相反，因此有必要对手性分子进行分离，分别考察其相关活性并加以合理使用。

β-环糊精是由7个吡喃型葡萄糖组成的低聚糖，具有上宽下窄、两端开口的中空筒状结构，其空腔内部相对疏水，外部由极性羟基包围而相对亲水，这种特殊结构使得β-环糊精具有极性和非极性的独特性质。基于β-环糊精分子内具有多个手性中心、其络合作用具有高度立体选择性且价格便宜，因此现有技术使用β环糊精作为流动相添加剂，采用高效液相色谱法对手性分子进行拆分。

但是，由于β-环糊精在水中溶解度小，将其用作流动相添加剂易造成色谱柱堵塞，因此β-环糊精的上述性质很大程度上限制了其在采用高效液相色谱法分离手性分子中的应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种采用反相高效液相色谱法分离手性对映体的方法，以全部或部分解决上述技术问题。

为了解决上述问题，本发明公开了一种采用反相高效液相色谱法分离手性对映体的方法，包括：

将羟丙基-β-环糊精作为添加剂添加至原始流动相中，得到所需的反相色谱流动相；

使用所述反相色谱流动相和反相色谱固定相，对手性对映体16α-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮和16β-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮进行反相高效液相色谱分离。

可选地，所述将羟丙基-β-环糊精

作为添加剂添加至原始流动相中包括：

将羟丙基-β-环糊精水溶液添加至所述原始流动相中。

可选地，所述原始流动相与所述羟丙基-β-环糊精水溶液的体积比为40:60～30:70；

所述羟丙基-β-环糊精水溶液的浓度为0.02～0.04g/ml。

可选地，在对所述16α-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮和所述16β-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮进行反相高效液相色谱分离时，所述反相色谱流动相的流速为1～1.2ml/min。

可选地，所述原始流动相为乙腈或甲醇。

可选地，所述反相色谱固定相为Eclipse Plus-C8色谱柱或ZORBAX SB-C18色谱柱。

可选地，所述Eclipse Plus-C8色谱柱或所述ZORBAX SB-C18色谱柱的柱温为35～40℃。

可选地，所述Eclipse Plus-C8色谱柱或所述ZORBAX SB-C18色谱柱的尺寸为250mm×4.6mm。

本发明实施例还提供了一种羟丙基-β-环糊精的应用，采用反相高效液相色谱法分离手性对映体16α-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮和16β-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮时，将羟丙基-β-环糊精作为添加剂添加至原始流动相中，所述羟丙基-β-环糊精和所述原始流动相组合成反相色谱流动相。

可选地，所述原始流动相为乙腈或甲醇。

与现有技术相比，本发明包括以下优点：

本发明提供了一种采用反相高效液相色谱法分离手性对映体的方法，选择羟丙基-β-环糊精作为流动相添加剂，由于羟丙基-β-环糊精在水中溶解度较大，因此将其作为流动相添加剂不会造成色谱柱堵塞，可以有效避免传统β-环糊精易造成色谱柱堵塞的缺陷。

依据本发明实施例所述方法对手性对映体进行分离时，使用常规色谱柱即可实现手性对映体的高效分离，操作简单。与传统的手性固定相高效液相色谱法相比，本发明实施例所述方法成本低廉，更加经济适用，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1是本发明实施例所述的一种采用反相高效液相色谱法分离手性对映体的方法的流程图；

图2是本发明实施例的16α(β)-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3,17-二酮手性对映体在不同手性流动相添加剂条件下的高效液相色谱图；