[发明专利]一种生产A82846B的基因工程菌及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201710258568.7 | 申请日： | 2017-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN108728390B | 公开（公告）日： | 2021-04-09 |
| 发明（设计）人： | 陈少欣;王伟艳;马巧慧;沈晓放;杨松柏 | 申请（专利权）人： | 上海医药工业研究院;中国医药工业研究总院 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P21/02;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 薛琦;朱水平 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生产 a82846b 基因工程 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种生产A82846B的基因工程菌，其特征在于，其是在生产A82846B的出发菌东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)的基因组中整合了内源卤化酶基因chaA，或者外源卤化酶基因；
其中，所述外源卤化酶基因是来源于东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)的vcm8、地中海拟无枝酸菌(Amycolatopsis mediterranei)的bhaA、替考游动放线菌(Actinoplanes teichomyceticus)的thaA或游动放线菌(Actinoplanes sp.)的halI基因。
2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述的chaA的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，所述的vcm8的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述的bhaA的核苷酸序列如SEQID NO:3所示，所述的thaA的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述的halI的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。
3.如权利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，所述生产A82846B的出发菌为东方拟无枝酸菌NRRL18099天然菌株。
4.一种制备如权利要求1-3任一项所述基因工程菌的方法，其特征在于，所述方法包括下列步骤：
1)PCR扩增或人工合成所述的chaA、vcm8、bhaA、thaA或halI；
2)构建包含所述的chaA、vcm8、bhaA、thaA或halI的重组质粒；
3)将构建的重组质粒转化到中间宿主菌；
4)将带有重组质粒的中间宿主菌和生产A82846B的出发菌进行接合培养。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述重组质粒的骨架为permE152质粒或pSET152。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的中间宿主菌为大肠杆菌ET12567/pUZ8002。
7.如权利要求4-6任一项所述的方法，其特征在于，所述的接合培养为在MS琼脂培养基培养，所述培养的温度为28℃。
8.一种A82846B的制备方法，其特征在于，包括将如权利要求1-3任一项所述的基因工程菌发酵，从发酵液中获得所述A82846B。
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