[发明专利]免疫诊断急性肝胰腺坏死综合症的蛋白卵黄抗体及其制备工艺和应用

权利要求书

1.一种抗急性肝胰腺坏死综合症毒素蛋白卵黄抗体，其特征在于，以pirA和pirB蛋白作为抗原免疫产蛋禽类，并从其卵黄中提取，其与所述pirA和pirB蛋白特异性结合。

2.根据权利要求1所述的卵黄抗体，其特征在于，所述pirA蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO.1所示的片段。

3.根据权利要求1或2所述的卵黄抗体，其特征在于，所述pirB蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO.2所示的片段。

4.一种如权利要求1-3任一项所述的抗急性肝胰腺坏死综合症毒素蛋白卵黄抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)制备所述pirA和pirB蛋白抗原；

(2)使用所述pirA和pirB蛋白抗原及佐剂，对产蛋禽类进行注射免疫，检取免疫禽类所产的免疫蛋；

(3)取所述免疫蛋的蛋黄，分离纯化IgY卵黄抗体。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括：

(a)通过PCR扩增技术获得所述pirA和pirB的基因序列，并将pirA和pirB的基因序列重组到表达载体中，构建重组载体；

(b)将重组载体转化到克隆菌种，筛选含有所述pirA和pirB基因序列的阳性转化菌；

(c)从所述阳性转化菌中提取所述重组载体，并转化到表达菌中，得到含有所述pirA和pirB基因序列的阳性表达菌，对所述阳性表达菌扩大培养，诱导所述pirA和pirB蛋白表达；

(d)分离纯化所述pirA和pirB蛋白。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述PCR扩增的引物为：

其中，所述pirA基因序列的PCR扩增引物为：

上游引物如SEQ ID NO.3所示，下游引物如SEQ ID NO.4所示；

其中，所述pirB基因序列的PCR扩增引物为：

上游引物如SEQ ID NO.5所示，下游引物如SEQ ID NO.6所示；

优选地，所述PCR退火温度为57-58℃。

7.根据权利要求4-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述免疫产蛋鸡的方法为将纯化后的pirA和pirB的重组抗原与佐剂按1:1混合乳化3-5h，进行四点肌肉注射免疫产蛋禽类；

优选地，所述注射免疫进行五次，第三次免疫后的第二周开始收集鸡蛋，并测定抗体效价。

8.根据权利要求4-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)制备所述pirA和pirB蛋白抗原，具体步骤如下：

(a)通过PCR扩增技术获得所述pirA和pirB的基因序列，并将pirA和pirB的基因序列重组到表达载体中，构建重组载体；

其中，所述pirA基因序列的PCR扩增引物为：上游引物如SEQ ID NO.3所示，下游引物如SEQ ID NO.4所示；

其中，所述pirB基因序列的PCR扩增引物为：上游引物如SEQ ID NO.5所示，下游引物如SEQ ID NO.6所示；

(b)将重组载体转化到克隆菌种，筛选含有所述pirA和pirB基因序列的阳性转化菌；

(c)从所述阳性转化菌中提取所述重组载体，并转化到表达菌中，得到含有所述pirA和pirB基因序列的阳性表达菌，对所述阳性表达菌扩大培养，诱导所述pirA和pirB蛋白表达；

(d)分离纯化所述pirA和pirB蛋白；

(2)使用所述pirA和pirB蛋白抗原及佐剂，对产蛋禽类进行注射免疫，检取免疫禽类所产的免疫蛋，具体步骤如下：

所述免疫产蛋鸡的方法为将纯化后的pirA和pirB的重组抗原与佐剂按1:1混合乳化3-5h，进行四点肌肉注射免疫产蛋禽类；

其中，所述注射免疫进行五次，第三次免疫后的第二周开始收集鸡蛋，并测定抗体效价；

(3)取所述免疫蛋的蛋黄，分离纯化IgY卵黄抗体。

9.一种如权利要求1-3中任一项所述的抗急性肝胰腺坏死综合症毒素蛋白卵黄抗体在制备抗急性肝胰腺坏死综合症的药物和/或试剂中的应用；

优选地，所述综合症为对虾急性肝胰腺坏死综合症。

10.一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求1-3中任一项所述的抗急性肝胰腺坏死综合症毒素蛋白卵黄抗体。