[发明专利]鼠毒素作为粘膜免疫佐剂的应用及含有该佐剂的鼠疫菌粘膜疫苗

说明书

技术领域

本发明属于动物免疫领域中鼠疫菌粘膜疫苗的免疫佐剂，特别是涉及鼠毒素作为粘膜免疫佐剂的应用及含有该佐剂的鼠疫菌粘膜疫苗。

背景技术

鼠疫是由鼠疫菌(Yersinia pestis)引起的烈性传染病。近年来，世界鼠疫疫情呈上升趋势，2000年世界卫生组织将鼠疫列为重新抬头的传染病(WHO.human plague in 1998and 1999.weekly epidemiological record 2000；75:338-43.)。另外，鼠疫菌是一种标准的生物战剂和生物恐怖剂，美国已将鼠疫菌列为恐怖分子最有可能使用的6种生物剂之一。1994年印度发生的腺鼠疫流行和2005年发生的刚果肺鼠疫流行引起了各国政府的高度重视(Campbell GL,Hughes JM.Plague in India:a new warning from an old nemesis.Ann Intern Med 1995Jan 15；122(2):151-3.WHO.Plague in the Democratic Republic of the Congo.who site 2005.)。我国是鼠疫疫情最严重的国家之一，至今没有任何种类的鼠疫疫苗进入临床试验阶段，显然鼠疫疫苗的研究迫在眉睫。

由于鼠疫灭活疫苗仅对腺鼠疫具有一定的保护作用，而且保护时间短，因此这类疫苗不适合于大规模的预防接种。美军在越战中曾使用的USP灭活疫苗于1999年也停止生产(Russell P,Eley SM,Hibbs SE,Manchee RJ,Stagg AJ,Titball RW.A comparison of Plague vaccine,USP and EV76vaccine induced protection against Yersinia pestis in a murine model.Vaccine 1995Nov；13(16):1551-6.)。鼠疫菌EV76疫苗株是最好的减毒活疫苗，能提供早期的保护作用，但有时副作用严重。重组亚单位疫苗和DNA疫苗能够克服传统疫苗的许多缺陷，不含有感染性组分，无致病性，而且对腺鼠疫和肺鼠疫具有一定的免疫保护作用。

目前，在鼠疫菌中发现的保护性抗原包括F1(荚膜抗原)、LcrV(V-抗原)、YscF和YopD。F1抗原由鼠疫菌pMT1质粒上的F1操纵子编码，以多聚体的形式在细胞表面形成荚膜，F1抗体通过阻断F1蛋白的抗吞噬作用从而具有免疫保护作用(Du Y,Rosqvist R,Forsberg A.Role of fraction 1antigen of Yersinia pestis in inhibition of phagocytosis.Infect Immun 2002Mar；70(3):1453-60.)。LcrV、YscF和YopD由鼠疫菌pCD1质粒编码，通过III型分泌系统(T3SS)分泌与转运(Cornelis GR.Molecular and cell biology aspects of plague.Proc Natl Acad Sci U S A 2000Aug 1；97(16):8778-83.)。LcrV是一种多功能蛋白，与鼠疫菌的抗吞噬能力有关，具有免疫保护和免疫抑制作用(Pettersson J,Holmstrom A,Hill J,Leary S,Frithz-Lindsten E,von Euler-Matell A,et al.The V-antigen of Yersinia is surface exposed before target cell contact and involved in virulence protein translocation.Mol Microbiol 1999Jun；32(5):961-76.)。YscF是鼠疫菌III型分泌系统分泌的针状表面蛋白，最近发现对鼠疫具有较好的免疫保护作用。YopD也是III型分泌系统分泌的表面蛋白，参与III型分泌系统转运过程，免疫保护作用不明显。