[发明专利]一种A型赛尼卡谷病毒样颗粒疫苗及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种A型塞尼卡谷病毒样颗粒疫苗及其制备方法和用途。本发明疫苗的有效成分为A型塞尼卡谷病毒样颗粒，所述A型塞尼卡谷病毒样颗粒是由A型塞尼卡谷病毒P1‑P2‑P3的基因序列通过杆状病毒表达系统表达、组装、纯化后得到，其中，所述的A型塞尼卡谷病毒P1‑P2‑P3的基因序列如SEQ ID NO.1所示。此外，本发明还提出了一种制备所述疫苗的高产方法，本发明利用杆状病毒级联反应基因调节元件构建杆状病毒载体的表达盒，采用适应高pH条件下无血清培养的昆虫细胞作为宿主细胞，使得重组杆状病毒表达SVA P1‑P2‑P3形成的VLPs的产量显著提高，显著增强了SVA VLPs生产效率。

技术领域

本发明涉及一种A型赛尼卡谷病毒样颗粒疫苗及其制备方法，属于生物医药技术领域。

背景技术

A型塞尼卡谷病毒(Seneca valley virus A，SVA)属于小RNA病毒科赛尼卡谷病毒属，病毒基因组为单股正链RNA，约由7800个核苷酸组成。在美洲、中国引起猪的水疱病和仔猪死亡。设计SVA病毒样颗粒疫苗以应对SVA疾病的血清学检验和防控至关重要。

病毒样颗粒疫苗保持了病毒灭活疫苗的良好免疫原性，并且具有高度安全性，可区别感染和免疫(DIVA)，其生产过程中避免使了用活的病毒，可以通过无血清悬浮培养。

杆状病毒表达质粒系统(Baculovirus expression vector system，BEVS)是高效抗原制备技术之一。使用杆状病毒表达盒在昆虫细胞生产病毒样颗粒抗原。表达盒产出病毒样颗粒抗原量高出300％倍，VLPs在大小、形态、功能上一致。表达盒的简单修饰改造显著改善VLP-为基础疫苗造价/效率，有助于塞尼卡谷病毒样颗粒疫苗商业竞争和广泛使用。

杆状病毒载体用于重组蛋白和疫苗抗原生产，普遍采用自养性加利福尼亚多核多角体病毒(Autographa californica multinuclear polyhedrosis virus，AcMNPV)。自杆状病毒表达载体系统(baculovirus expression vector system，BEVS)在80年代开发成功以来，许多重组蛋白，从细胞内酶到膜结合蛋白已在杆状病毒感染的昆虫细胞成功表达。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种A型赛尼卡谷病毒样颗粒疫苗及其高产方法，为达到上述目的，本发明提供了含新型表达盒的重组杆状病毒，提供了无血清悬浮培养驯化昆虫细胞SFHi5pH，提供了提供稳定、高效、质量可控生产A型赛尼卡谷病毒颗粒的方法，同时提供了生产A型赛尼卡谷病毒颗粒疫苗的检验和评估方法。

具体的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种A型塞尼卡谷病毒样颗粒疫苗，其有效成分为A型塞尼卡谷病毒样颗粒，所述的A型塞尼卡谷病毒样颗粒是由A型塞尼卡谷病毒P1-P2-P3的基因序列通过杆状病毒表达系统表达、组装、纯化后得到，其中，所述的A型塞尼卡谷病毒P1-P2-P3的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步的，本发明还提供了一种制备所述的A型塞尼卡谷病毒样颗粒疫苗的常规方法以及一种在常规方法基础上通过改进后的高产方法：

一种制备所述的A型塞尼卡谷病毒样颗粒疫苗的常规方法，包括以下步骤：

(1)将A型塞尼卡谷病毒P1-P2-P3的基因序列插入昆虫杆状病毒pFastBac1或pFastBac-Dual载体中，经酶切鉴定及测序，筛选出阳性重组载体，并转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞，获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid；

(2)将含A型塞尼卡谷病毒P1-P2-P3的基因序列的重组杆状病毒穿梭载体rBacmid转染入宿主昆虫细胞株Hi5中，获得重组昆虫杆状病毒，命名为AcMNPV-SVA-P1-P2-P3；