[发明专利]一种能适应高固液比体系的镉污染土壤治理复合菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种能适应高固液比体系的镉污染土壤治理复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述的复合菌剂由隐性嗜酸杆菌(Acidiphilium cryptum)、皱褶假丝酵母菌(Candidarugosa)、固氮醋酸杆菌(Acetobacter diazotrophicus)、粘红酵母菌(Rhodotorulaglutinis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、嗜酸氧化硫硫杆菌(Acidithiobacillus thiooxidans)和嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidthiobacillusferrooxidans)混合组成；

先将各种微生物单独培养，当达到对数生长期时离心收菌并计数，根据微生物数量比例混合获得两种复合群落，其中隐性嗜酸杆菌、皱褶假丝酵母菌、固氮醋酸杆菌、粘红酵母菌和铜绿假单胞菌按照1～1.5：1～1.5：1～1.5：1～1.5：1～1.5的比例混合得 到复合群落a；嗜酸氧化硫硫杆菌和嗜酸氧化亚铁硫杆菌按照1.1～1.5：1.2～1.5的比例混合得到复合群落b；将得到的复合群落a和b按照菌浓数量比1:1混合得到复合群落c，最后再培养得到复合菌剂。

2.根据权利要求1所述的一种能适应高固液比体系的镉污染土壤治理复合菌剂的制备方法，其特征在于，各微生物单独培养的培养基成分为：(NH₄)₂SO₄，0.3g/L；KCl，0.01g/L；K₂HPO₄，0.05g/L；MgSO₄·7H₂O，0.05g/L和Ca(NO₃)₂，0.001g/L；单独培养隐性嗜酸杆菌、皱褶假丝酵母菌、固氮醋酸杆菌、粘红酵母菌和铜绿假单胞菌时，培养基中加入葡萄糖0.5～1g/L，酵母粉0.05～0.1g/L；单独培养嗜酸氧化硫硫杆菌和嗜酸氧化亚铁硫杆菌时，在培养基中加入硫粉0.5～1g/L，硫酸亚铁2.50～4.47g/L。

3.根据权利要求1所述的一种能适应高固液比体系的镉污染土壤治理复合菌剂的制备方法，其特征在于，将得到的复合群落a和b分别在含镉培养基中进行驯化；然后将复合群落a和b混合得到复合群落c，最后在高固液比体系的镉污染土壤环境下进行适应性培养得到复合菌剂。

4.根据权利要求3所述的一种能适应高固液比体系的镉污染土壤治理复合菌剂的制备方法，其特征在于，将得到的复合群落a和b分别在驯化培养基中进行驯化，驯化培养基成分为：(NH₄)₂SO₄，0.3g/L；KCl，0.01g/L；K₂HPO₄，0.05g/L；MgSO₄·7H₂O，0.05g/L和Ca(NO₃)₂，0.001g/L；培养复合群落a时，在培养基中加入葡萄糖0.5～1g/L，酵母粉0.05～0.1g/L；培养复合群落b时在培养基中加入硫粉0.5～1g/L，硫酸亚铁2.50～4.47g/L；此外，在培养基中均加入-20目的5-10wt％镉污染土样，土壤中镉含量范围为10～30mg/kg；每次传代接种的微生物浓度为1-4×10⁷个/mL，培养后微生物的浓度至少达到4×10⁸-10⁹个/mL；复合群落a和b各自培养5-8代后，按照菌浓度等比例混合得到复合群落c。

5.根据权利要3所述的一种能适应高固液比体系的镉污染土壤治理复合菌剂的制备方法，其特征在于，复合群落a和b的驯化过程在200-250mL的锥形瓶中进行，恒温培养箱转速为170-175rpm，培养温度为25-30℃，初始pH值为2.5-3.0。