[发明专利]从瓯柑果实中分离纯化多甲氧基黄酮类化合物的方法

说明书

本发明提供一种从瓯柑果实中分离纯化多甲氧基黄酮类化合物的方法。该方法以瓯柑果实的果皮为原料，采用超声波辅助提取，固相萃取柱去糖和分段，进而使用高速逆流色谱(HSCCC)纯化分离技术，最终得到高纯度的川陈皮素、橘皮素、5‑去甲川陈皮素三种多甲氧基黄酮类化合物。本发明无需高温高压及惰性气体的保护，操作简单，生产周期短，样品用量少，条件稳定容易控制，生产周期短，适用性广，纯化产物回收率高，纯度高，三种化合物的纯度均在98％以上，所用的溶剂可回收后重复利用，成本较低，纯化过程精确定性定量，准确度高；可以提高HSCCC的物质分辨率和重现度。适用于工业化生产和科学研究。

技术领域

本发明属于天然植物中有效成分的提取分离纯化技术领域，具体涉及从瓯柑果实中分离纯化多甲氧基黄酮类化合物的方法，是以瓯柑果实果皮为原料，采用超声波辅助提取、C18固相萃取柱和HSCCC(高速逆流色谱)的联用技术同时分离纯化川陈皮素、橘皮素和5-去甲川陈皮素三种多甲氧基黄酮类化合物的方法。

背景技术

瓯柑(Citrus reticulata cv.Suavissima)是芸香科柑橘属的一个栽培变种，也是浙江省温州、丽水地区的传统特产，已经有两千多年的栽培历史。瓯柑在民间具有抗肿瘤、祛热生津、化痰止咳、清凉解毒等特殊食药功能，这些作用可能与瓯柑中富含多甲氧基黄酮类化合物有关。多甲氧基黄酮(Polymethoxylated Flavonoids,PMFs)是指具有4个及4个以上甲氧基取代基的黄酮类化合物，主要来源于芸香科柑橘属植物，尤其在柑橘果实的果皮中含量丰富。柑橘果实中的多甲氧基黄酮类化合物在抗肿瘤、抗炎、抗诱变和保护心血管等方面具有很好的活性，关于多甲氧基黄酮的生物活性机制研究也逐渐深入。自1934年首次分离出多甲氧基黄酮类化合物单体以来，人们对其活性进行了大量的研究。近年来研究发现，多甲氧基黄酮类化合物具有抑制癌细胞增殖、抵抗肿瘤侵袭和转移作用、促进癌细胞凋亡和自噬等生物活性。

川陈皮素、橘皮素和5-去甲川陈皮素是柑橘中主要的多甲氧基黄酮类化合物。川陈皮素(nobiletin)，别名：川皮亭、蜜橘黄素，CAS：478-01-3，分子式：C₂₁H₂₂O₈，分子量：402.395，化学名称为2-(3,4-Dimethoxyphenyl)-5,6,7,8-tetramethoxy-4H-chromen-4-one。存在于瓯柑或其他柑橘类水果中一类物质，纯品白色、粉末状。橘皮素(tangeretin)，CAS：2798-20-1，分子式：C₂₀H₂₀O₇，分子量：372.369，外观：白色粉末。5-去甲川陈皮素(5-demethylnobiletin)，CAS：2174-59-6，分子式：C₂₀H₂₀O₈，分子量：388.368，外观：淡黄色粉末。

随着多甲氧基黄酮类化合物的物质结构确定以及对其生物活性的深入研究，多甲氧基黄酮类化合物的市场需求量逐渐增大。现有关于多甲氧基黄酮的分离主要采用大孔树脂层析和制备型高效液相色谱，其局限性为工艺复杂，成本较高，分离得到的单体纯度低或制备量，难以发展成为分离纯度高、制备量大的分离技术。

发明内容

鉴于上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提供一种分离纯化多甲氧基黄酮类化合物的方法，是一种从瓯柑果实果皮中分离纯化川陈皮素、橘皮素、5-去甲川陈皮素的方法，利用该方法可快速有效地从瓯柑果实果皮中同时分离纯化得到纯度不低于98％的川陈皮素、橘皮素和5-去甲川陈皮素，具体通过以下步骤实现：

(1)样品提取：取一定质量的冷冻干燥的瓯柑果皮粉末用95％乙醇(固液比为1：20)超声提取2次，提取温度25℃，每次45min，经真空抽滤后，合并上清液，在旋转蒸发仪上蒸干至无乙醇相，溶于去离子水中。