[发明专利]一种医用脱细胞真皮基质及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医用生物材料技术领域，具体涉及一种医用脱细胞真皮基质及其制备方法。

背景技术

对于大面积烧伤或者创伤的病人来说，皮肤移植是最好的治疗方法，但是对于烧伤面积特别巨大的创面采用自体全厚皮移植几乎不可能，而自体微粒皮或薄皮片移植需要真皮支架。来源于人的尸体皮制作的无细胞真皮作为真皮替代物最为理想，但是由于伦理和HIV等病毒的原因，大大限制了其应用。目前，根据实践和临床的使用证实脱细胞真皮基质是一种新型的创伤修复材料，其应用领域从最初的深度烧伤创面的治疗逐渐扩展到整形、美容、口腔、耳鼻喉、普外科等领域。

脱细胞真皮基质制备的目的是尽可能的去除皮肤组织中免疫原性很强的细胞成分（表皮细胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中的血管内皮细胞、成纤维细胞等），保留免疫原性较弱的细胞外基质成分以及真皮组织完整的三维空间结构。这样能提供引导组织再生的生物支架，达到最大限度修复组织缺损的目的。目前脱细胞真皮基质的制备方法主要有一下几种：1、Dispase II-Triton法：该方法细胞脱除彻底，但是对基底膜破坏大，不利于上皮细胞的粘附与生长；2、高渗盐-SDS法：该方法基底膜保留完整，但真皮中纤维结合素、弹力素等含量较高，因此可能会有较高的免疫原性；3、高渗盐-氢氧化钠销蚀法：该方法利用高渗盐去除表皮，同时利用氢氧化钠中碱离子的吸水作用，夺去组织细胞中的水分，使细胞脱水，该方法胶原纤维结构完整，排列较正常疏松，但是对于细胞的去除效果仍有待提高；4、反复冻融法，由于全部都是物理操作过程，时间久、周期长，现在基本已经不用。

以上方法中，作用手段单一，处理时间过短，无法将免疫原性物质全面清除，如果作用时间过长，又会造成基底膜破坏，并有可能造成完整细胞骨架的缺失。同时，人工物理手法去除猪毛，费时费力，占用生产者大量工时。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种医用脱细胞真皮基质的制备方法，既能够有效降低真皮基质的免疫原性，又保留了真皮基质正常的胶原结构，同时使用无毒化学试剂，有效去除动物毛发，处理过程省时省力，节约生产成本，又不会造成环境污染。

同时，本发明还在于提供一种采用本发明制备方法制备的医用脱细胞真皮基质。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种医用脱细胞真皮基质的制备方法，包括以下操作步骤：

1）将新鲜动物皮肤去肉后，依次进行消毒、清洗、高渗盐处理，撕去表皮，得待处理真皮皮片；

2）将步骤1）制得的真皮皮片放入碱液和过氧化氢的混合溶液中浸泡3~24小时；

3）将步骤2）处理后的真皮皮片进行裁切、剖片后浸泡在含有胰蛋白酶的溶液中，在35~40℃温度下，pH7~9，浸泡1~12小时；

4）将步骤3）处理后的真皮皮片清洗后，冷冻存放，即完成。

步骤1）中所述动物皮肤为猪皮、羊皮或牛皮。

上述制备方法还包括将步骤3）处理后的真皮皮片浸泡在交联剂中进行室温交联1~24小时。酶消化后进行交联处理，避免胶原蛋白在胰蛋白酶溶液中降解过度，造成的胶原蛋白网络结构和排列方式的损坏，确保真皮基质结构的完整性，在降低产品的硬度，使产品更加柔软贴合皮肤的同时，使产品具有一定的抗张强度，满足医用敷料的要求。而且交联剂的使用还会进一步的封闭抗原，减少免疫反应，还可以提高产品的收缩温度。

可选的，所使用的交联剂的配制方法是将碳化二亚胺盐酸盐和琥珀酰亚胺加入到含有体积百分含量为40%的乙醇水溶液中，pH5.5，搅拌均匀。

可选的，所使用的交联剂中各组分的质量浓度为：碳化二亚胺盐酸盐为0.15%-2.0%，琥珀酰亚胺浓度为0.05%-0.5%。

优选的，所使用的交联剂中各组分的质量浓度为：碳化二亚胺为0.5%，琥珀酰亚胺为0.2%。

可选的，步骤2）中混合溶液中碱的浓度为2~6%；过氧化氢的浓度为0.5~5%。

可选的，所述碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾。

为了确保碱液和过氧化氢溶液对真皮皮片上的毛发的去除效果，以及对皮片中蛋白纤维的膨胀疏松效果，同时避免对皮片胶原空间结构和排列方式的破坏，优选的，步骤2）中混合溶液中氢氧化钠的浓度为4%，过氧化氢的浓度为2%，在混合溶液中的浸泡时间为18小时。

可选的，步骤3）中胰蛋白酶溶液中胰蛋白酶的浓度为0.05~0.5%。

可选的，所述胰蛋白酶为医药级胰蛋白酶。