[发明专利]一种蛋白基溶酶体荧光指示剂

说明书

一种蛋白基溶酶体荧光指示剂及其应用，属于荧光指示剂技术领域。其首先是分别配制0.1mmol/L的牛血清白蛋白水溶液和0.1mmol/L的溴酚蓝水溶液；然后将牛血清白蛋白水溶液、溴酚蓝水溶液和超纯水按照10％:10～50％:40～80％的体积百分比混合均匀，得到混合溶液；其中，牛血清白蛋白水溶液、溴酚蓝水溶液和超纯水的体积百分比之和为100％；将所得混合溶液在100℃水浴条件下加热2～10min，得到蛋白基溶酶体荧光指示剂胶体溶液。此蛋白质基溶酶体荧光指示剂BSA‑BPB水溶性好，在水中分散性好，不影响细胞的生长环境，且对于细胞的毒性低，生物相容性好，适合应用于细胞溶酶体标记。合成方法简单，原料成本低廉，可大量制备。

技术领域

本发明属于荧光指示剂技术领域，具体涉及一种蛋白基溶酶体荧光指示剂及其应用。

背景技术

随着生命科学的发展，细胞以及亚细胞结构已经被人们所熟知。溶酶体是存在于细胞结构中的一种单层膜的囊状细胞器，起到消化细胞内无用异物的作用，其在细胞的活动中扮演者重要的作用，所以对于溶酶体的定位与追踪，有着重要的意义。目前对于溶酶体的标记，大多是利用抗体以及荧光染料，并且已经达到商业化的程度，但是这些指示剂都有其不同的缺点，不容易改进，例如抗体的价格昂贵，并且储存条件苛刻，在使用过程中容易失活；而荧光染料大多是一些有机的小分子，这些分子对于细胞本身就有一定的毒性，而且多数染料水溶性不好，需要有机溶剂助溶，有机溶剂对于细胞的生长影响也较大，造成了荧光染料用于溶酶体指示剂的限制，并且由于溶酶体内的低pH环境，这些分子的稳定性也有很大程度的影响。所以设计并且合成具有良好的生物相容性，合成方法简单，原料价格低廉等优良性质的新型的溶酶体指示剂势在必行。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的蛋白基溶酶体荧光指示剂BSA-BPB(BSA：牛血清白蛋白；BPB：溴酚蓝)及其应用。该指示剂制备方法简单，原料价格低廉，具有良好的水溶性和生物相容性。为实现以上目的，本发明所述的蛋白基溶酶体荧光指示剂，由如下步骤制备得到：

步骤1，分别配制0.1mmol/L的牛血清白蛋白水溶液和0.1mmol/L的溴酚蓝水溶液；

步骤2，将牛血清白蛋白水溶液、溴酚蓝水溶液和超纯水按照10％:10～50％: 40～80％的体积百分比混合均匀，得到混合溶液；其中，牛血清白蛋白水溶液、溴酚蓝水溶液和超纯水的体积百分比之和为100％；将所得混合溶液在100℃水浴条件下加热2～10min，得到蛋白基溶酶体荧光指示剂胶体溶液。

本发明还提供了一种上述新型蛋白基溶酶体荧光指示剂BSA-BPB在细胞溶酶体荧光标记中的应用。

与现有技术相比，本发明所述的新型蛋白基溶酶体荧光指示剂BSA-BPB具有以下有益效果：

(1)合成方法简单，原料成本低廉，可大量制备。

(2)此蛋白质基溶酶体荧光指示剂BSA-BPB水溶性好，在水中分散性好，不影响细胞的生长环境，适用于细胞溶酶体标记(SEM照片中样品可以看出分散性好，并且制样的样品是水溶液，也能间接说明其水溶性)。

(3)蛋白质基溶酶体荧光指示剂BSA-BPB对于细胞的毒性低，生物相容性好，适合应用于细胞溶酶体标记。(图2与大肠杆菌毒性实验可以证明)。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的蛋白基溶酶体荧光指示剂BSA-BPB的扫描电子显微镜图；从图中可以看出，其分散性良好，尺寸在300nm左右。

图2为本发明实施例1制备的的蛋白基溶酶体荧光指示剂BSA-BPB相对于大肠杆菌的细胞毒性实验的生长曲线图；黑色为正常大肠杆菌(DH5菌)生长，灰色为在培养基中加入1mg/mL的蛋白基溶酶体荧光指示剂BSA-BPB后大肠杆菌的生长，从图中看，两者生长趋势相同，说明本发明实施例1制备的的蛋白基溶酶体荧光指示剂BSA-BPB不影响大肠杆菌的生长。