[发明专利]一种以苦皮藤为原料经微生物发酵制备杀虫剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及到解一株淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)H47和短小芽孢杆菌及苏云金杆菌微生物发酵苦皮藤制备植物源杀虫剂的生产方法，属于微生物和发酵技术领域。

背景技术

苦皮藤(Celastrus angulatus)为卫矛科南蛇藤属植物，其为藤状灌木；小枝常具4-6纵棱，皮孔密生，圆形到椭圆形，白色，腋芽卵圆状，长2-4mm。叶大，近革质，长方阔椭圆形、阔卵形、圆形，长7-17cm，宽5-13cm，先端圆阔，中央具尖头，侧脉5-7对，在叶面明显突起，两面光滑或稀于叶背的主侧脉上具短柔毛；叶柄长1.5-3cm；托叶丝状，早落。聚伞圆锥花序顶生，下部分枝长于上部分枝，略呈塔锥形，长10-20cm，花序轴及小花轴光滑或被锈色短毛；小花梗较短，关节在顶部；花萼镊合状排列，三角形至卵形，长约1.2mm，近全缘；花瓣长方形，长约2mm，宽约1.2mm，边缘不整齐；花盘肉质，浅盘状或盘状，5浅裂；雄蕊着生花盘之下，长约3mm，在雌花中退化雄蕊长约1mm；雌蕊长3-4mm，子房球状，柱头反曲，在雄花中退化雌蕊长约1.2mm。蒴果近球状，直径8-10mm；种子椭圆状，长3.5-5.5mm，直径1.5-3mm。花期5-5月。广泛分布于我国黄河、长江流域的丘陵和山区。

苦皮藤的根皮和茎皮均含有多种强力杀虫成分，目前已从根皮或种子中分离鉴定出数十个新化合物，特别是从种油中获得4个结晶，即苦皮藤酯I-Ⅳ、从根皮中获得5个纯天然产物，即苦皮藤素I-V。这些苦皮藤中的杀虫活性成分均简称为苦皮藤素；其中苦皮藤素I对害虫具有拒食作用，苦皮藤素II、III对小地老虎、甘蓝夜蛾等昆虫有胃毒毒杀作用，苦皮藤毒素IV对昆虫具有选择性麻醉作用，苦皮藤素V作用于昆虫的消化系统，破坏中肠肠壁细胞的质膜及内膜体液穿过肠壁细胞进入消化道，引起昆虫上吐下泻、失水而死,因而被用作制备植物性杀虫剂。

植物在进化中产生具有保护作用的次生代谢物质，这些物质往往可以抵抗其他生物的侵害。以植物次代谢物为主要活性成分的植物源杀虫剂一般容易降解，不会对土壤与水源形成持久性影响；植物源杀虫剂一般对鱼、鸟、哺乳动物与人毒性较低，使用安全：植物源杀虫剂对天敌具有一定的选择作用，有可能控制虫害的再猖獗。上述优势使得植物源杀虫剂成为替代化学农药防治害虫很好的选择。利用合适的植物促生菌发酵苦皮藤，不仅有利于生理活性物质的提取，还不易造成活性物质的失活，促生菌本身还有较好的杀虫防病和促生作用。有利于改善植物生长和增强杀虫效果，有利于环境保护和苦皮藤植物本身的有效利用。

发明内容

针对现有技术存在的上述缺陷，本发明利用苦皮藤植物为原料，用2013年6月24日保存于中国典型培养物保藏中心的，保藏编号为：CCTCCNO：M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47(该菌株以下简称：解淀粉芽孢杆菌H47CCTCCM2013283)和市售短小芽孢杆菌及市售苏云金杆菌发酵制备植物源杀虫剂，有利于改善植物生长和增强杀虫效果，有利于环境保护。

本发明的发酵技术方案：

1)菌种准备：将解淀粉芽孢杆菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢杆菌、市售苏云金杆菌分别接种于种子培养基，于30℃，250r/min震荡培养12h；所述种子培养基成分按g/L计为：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分为水，121℃高压灭菌15min，调整pH至7.0。按一定比例混合做种子。

2)发酵液准备：选用质量优良的苦皮藤，用水冲洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗净，经搅碎机搅碎后待用。

3)发酵罐空消及空气管道消毒：按相关说明书进行发酵罐空消。

4)发酵液实消：将步骤2所得苦皮藤放入发酵罐中，补充自来水至终体积为10L，按相关说明书进行实消灭菌。

5)接种培养：当发酵罐温度降至37℃时，将步骤1所得种子按体积比1％的接种量，接种至装有苦皮藤的发酵罐中，25—30℃条件下培养3—12天，设置工艺要求的通气量并保持罐压，设置各其他培养参数培养。

6)出料：培养完毕，放出发酵液，过滤，过滤后所得发酵液即为杀虫剂成品。

本发明的有益效果：

本发明提供了发酵苦皮藤制得一种生物源杀虫剂的方法。本发明制备方法及过程中无污染安全可靠，发酵时间周期短，工艺环节少，简单易操作，可节省投资和运行费用。与传统化学药剂相比，其具绿色安全，环境友好等优势，且促生菌本身还有较好的杀虫防病和促生作用，拥有广阔的应用前景。