[发明专利]一种基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N‑亚硝胺的提取及测定方法

权利要求书

1.一种基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将戒烟制品加入浓度为5～100mmol/L的乙酸铵溶液进行提取，得粗提取液；

2)将步骤1)所得的粗提取液流过经活化处理后的HiCapt MCX固相萃取柱，完成上样；

3)用甲醇水溶液进行淋洗；

4)用丙酮、丙酮氨水混合液、丙酮甲酸混合液中的任意一种进行洗脱，即得N-亚硝胺的提取液；所述丙酮氨水混合液中丙酮、氨水的体积比为97～99:3～1；丙酮甲酸混合液中丙酮、甲酸的体积比为97～99:3～1；所述氨水的质量分数为35％。

2.如权利要求1所述的基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的提取方法，其特征在于，所述戒烟制品中烟草特有N-亚硝胺包括NNN、NNK、NAT和NAB。

3.根据权利要求1所述的基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的提取方法，其特征在于：步骤2)中所述活化处理为：依次用丙酮、甲醇水溶液、水流经HiCapt MCX固相萃取柱。

4.根据权利要求1所述的基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的提取方法，其特征在于：步骤3)甲醇水溶液中甲醇的体积分数为5～20％。

5.根据权利要求1所述的基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的提取方法，其特征在于：步骤1)中所得粗提取液在上样前调pH至3.0～11.0。

6.一种基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

1.N-亚硝胺提取液的制备

1.1在戒烟制品中依次加入同位素内标和浓度为5～100mmol/L的乙酸铵溶液进行提取，得粗提取液；

1.2将步骤1.1所得粗提取液流过经活化处理后的HiCapt MCX固相萃取柱，完成上样；

1.3用甲醇水溶液进行淋洗；

1.4用丙酮、丙酮氨水混合液、丙酮甲酸混合液中的任意一种进行洗脱，即得N-亚硝胺的提取液；

2.戒烟制品中N-亚硝胺的测定

将步骤1.4中所得的提取液吹干，用甲酸铵溶液、甲酸乙腈溶液配制而成的复溶液进行复溶，之后进行液相色谱-串联质谱测定。

7.根据权利要求6所述的基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的测定方法，其特征在于：步骤2中复溶液由0.01mol/L的甲酸铵溶液与甲酸体积分数为0.1％的甲酸乙腈溶液按照1～2:1～2的体积比配制而成。

8.根据权利要求6所述的基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的测定方法，其特征在于：步骤1.1中同位素内标包括NNN-d4、NNK-d4、NAT-d4、NAB-d4。

9.根据权利要求6所述的基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的测定方法，其特征在于：所述液相色谱-串联质谱分析的条件为：色谱柱：Poroshell120EC-C18；柱温：40℃；进样量：5μL；流动相A为0.01mol/L甲酸铵溶液，流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液；流速：0.4mL/min；流动相梯度程序：t＝0min，10％B，t＝2.0min，40％B，t＝4.0min，60％B，t＝6.0min，90％B，t＝9.0min，90％B，t＝9.5min，10％B，t＝15.0min，10％B；质谱条件：电喷雾电压5000V；雾化气压力50psi；辅助雾化气压力50psi；气帘气压力35psi；离子源温度450℃；进口电压8V；出口电压10V；去簇电压40V；驻留时间40ms；监测模式：多反应监测。

10.根据权利要求9所述的基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中N-亚硝胺的测定方法，其特征在于：所述多反应监测中NNN、NNK、NAT和NAB的定量离子对依次为178.1>148.2、208.1>122.1、190.1>160.1和192.1>162.2，相应的碰撞电压依次为15、16、15和17eV；NNN、NNK、NAT和NAB的定性离子对依次为178.1>120.1、208.1>106.1、190.1>106.1和192.1>133.1，相应的碰撞电压依次为15、16、15和17eV；NNN-d4、NNK-d4、NAT-d4和NAB-d4的定量离子对依次为182.1>152.2、212.1>126.1、194.1>164.1和196.1>166.2，相应的碰撞电压依次为15、16、15和17eV。