[发明专利]赭曲酶毒素A光电化学适配体传感电极的制备方法和应用有效
申请号: | 201710238583.5 | 申请日: | 2017-04-13 |
公开(公告)号: | CN107085019B | 公开(公告)日: | 2019-08-23 |
发明(设计)人: | 王琪;熊孟;季更生;颜辉;邓娜;叶繁;张国政;武国华 | 申请(专利权)人: | 江苏科技大学 |
主分类号: | G01N27/30 | 分类号: | G01N27/30;G01N27/327 |
代理公司: | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人: | 楼高潮 |
地址: | 212003*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 赭曲酶 毒素 光电 化学 适配体 传感 电极 制备 方法 应用 | ||
1.一种赭曲酶毒素A光电化学适配体传感电极的制备方法,其特征在于包含以下步骤:
A、配制二氧化钛纳米颗粒溶胶,并滴涂于导电玻璃电极表面,电极置于450~500℃高温烧结30分钟;
B、合成硫化镉量子点溶液,并将步骤A烧结后二氧化钛/导电玻璃的电极浸入该溶液中吸附量子点;
C、通过化学耦合反应将赭曲酶毒素核酸适配体桥接于步骤B得到的硫化镉/二氧化钛/导电玻璃电极表面,使用乙醇胺缓冲液封闭电极活性位点,最终得到适配体/硫化镉/二氧化钛/导电玻璃传感电极并测试其对不同浓度赭曲酶毒素的光电化学响应;
其中,步骤A中,所述的二氧化钛纳米颗粒粒径为21~25nm,浓度为0.5~5mg/mL;所述的导电玻璃为氧化铟锡玻璃、氟掺杂氧化锡玻璃或者铝掺杂氧化锌玻璃,经过2mol/L KOH的异丙醇溶液中煮沸20分钟,超纯水和乙醇清洗,120℃干燥2小时,面积为0.25cm2,表面涂覆量为20~30μL;
步骤B中,所述的硫化镉量子点采用水相合成法,加入巯基乙酸使其表面带有大量的羧基基团,粒径为5±1nm,浓度为1.0~1.5mg/mL;所述的烧结电极对量子点的吸附时间为3~12h,电极表面成膜厚度为1~20μm;
步骤C中,所述的赭曲酶毒素核酸适配体的碱基序列为5’-NH2-(CH2)6-GAT CGG GTGTGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-3’,浓度为0.5~2μM,体积为20~30μL,桥接温度和时间为4℃和12~18小时;所述的乙醇胺缓冲液为10mM Tris-HCl pH 8.5含1mM MEA,封闭温度和时间为4℃和1~2小时。
2.一种根据权利要求1所述的赭曲酶毒素A光电化学适配体传感电极在食品安全分析检测中的应用方法,其特征在于,所述应用是采用标准三电极系统,适配体/硫化镉/二氧化钛/导电玻璃传感电极为工作电极,银/氯化银电极为参比电极,铂电极为对电极,激发光的波长范围为410~510nm,光电流的测定在恒定电位下0V vs饱和银/氯化银电极;所述方法的具体步骤是,将20~30μL 10mM pH 8.5 Tris-HCl缓冲液含不同浓度待测赭曲酶毒素A滴涂于传感电极区37℃反应1~2小时,其中缓冲溶液含有120mM NaCl,5mM KCl,20mM CaCl2,电极清洗,置于检测缓冲液中进行光电化学分析测试,光电流变化的差值与赭曲酶毒素A建立标准曲线。
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