[发明专利]一种稳定的酶法肌酸激酶检测诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明试剂盒涉及生化试剂领域，具体涉及一种检测诊断试剂盒，主要是涉及一种稳定的酶法肌酸激酶检测诊断试剂盒。

背景技术

肌酸激酶是细胞内能量转运，肌肉收缩，ATP再生有直接关系的一种重要激酶，通常存在于哺乳类动物的心脏，肌肉以及脑等重要组织器官中，肌酸激酶同工酶一般分为4种形式：线粒体型，主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中；肌肉型，主要存在于各种肌肉细胞中；杂化型，主要存在于心肌细胞中；脑型，主要存在于脑细胞中，临床上一般通过肌酸激酶检测进而诊断心肌梗塞，心肌梗塞患者发病后的2小时内，血液中肌酸激酶浓度升高，和乳酸脱氢酶、谷草转氨酶相比，肌酸激酶活性变化，优先表现出来，肌酸激酶是临床上重要的一种可检测酶，在诊断心肌梗塞上有较高临床检测价值和预防价值。

肌酸激酶检测方法如图1。

NADH在340nm处有吸收峰，通过监测340nm处的吸光度变化，然后乘以标准物质浓度即可计算出NADH变化速率，进而计算出计算激酶酶活；肌酸激酶含有巯基集团，具有较高的还原性，极易识货，因此检测时，要用带有巯基的物质来激活巯基集团，常用的物质主要有一下几种：巯基乙醇、硫代甘油、乙酰半管氨酸等；巯基在试剂中及其活跃，因此巯基的保护使其稳定，成为试剂中难以解决的一大难题；很大程度上一些专利和文献报道和介绍了是巯基集团稳定的方法，主要是隔离巯基物质，避免和氧气接触，但是缺陷依然存在。

发明内容

本发明内容主要是在于解决巯基集团在试剂中的稳定性问题，进而提高试剂稳定性，改善产品质量。

本发明是一种稳定的酶法肌酸激酶检测诊断试剂盒，本发明试剂盒是由R1 和R2组成的双试剂液体型检测诊断试剂盒。试剂组成为：

试剂R1为：

咪唑缓冲液 0.1mol/L

醋酸镁 3-5g/L

乙酰半胱氨酸 20mmol/L

羟乙基叉二磷酸 15mmol/L

辅酶I1-5m mol/L

葡萄糖 5g/L

己糖激酶 2-8KU/L

曲拉通X-4050.5ml/L

稳定剂复合物质 0.5-2.5%

试剂R2组成为：

咪唑 0.1mol/L

羟乙基叉二磷酸 10mmol/L

单磷酸腺苷盐 3g/L

二磷酸腺苷盐 5g/L

二五磷酸盐 0.45g/L

磷酸肌酸 32g/L

曲拉通X-4051.5ml/L

其中稳定剂复合物主要是葡聚糖4000、丙三醇、甘露醇、曲拉通X-405和EDTA-Na₂按照不同的比例组成的。

本发明一种稳定的酶法肌酸激酶检测诊断试剂盒，试剂中物质成分的选择依据是：

咪唑缓冲液主要是缓冲作用，保证反应时外环境的稳定，致使检测结果不会受到波动和影响。

醋酸镁提供镁离子，用于激活反应中参与反应的酶类的活性，保证酶能够有效的发挥作用。

乙酰半胱氨酸用于提供巯基集团，激活肌酸激酶中的巯基。

辅酶I、葡萄糖作为反应底物。

己糖激酶催化6-P-葡萄糖反应生成6-P-葡萄酸。

曲拉通X-405作为表面活性剂。

羟乙基叉二磷酸起到良好的缓蚀阻垢作用。

单磷酸腺苷盐、二磷酸腺苷盐、二五磷酸盐和磷酸肌酸用来提供不同的磷酸集团。

葡聚糖4000、丙三醇、甘露醇、曲拉通X-405和EDTA-Na₂按照不同比例组成的复合物能够形成一种球形膜，将酶和巯基集团包裹起来，起到一定的稳定和保护作用。

本发明一种稳定的酶法肌酸激酶检测诊断试剂盒，在很大程度上解决了试剂不稳定问题；本发明试剂盒成本较低，相对于市场流通的同类试剂盒，造价远低于同类试剂盒。

应用本发明试剂盒，可以在迪瑞系列，迈瑞系列，东芝系列和日立系列全自动生化分析仪上进行操作，具体操作方式以BS-800为例：样本量：试剂R1：试剂R2=10ul:225ul:75ul，检测波长设置为340nm检测方法为速率法，反应方向为上升反应，校准物质以朗道复合校准品为主。

附图说明

图1为常规肌酸激酶检测方法；

图2为试剂盒与对照试剂盒相关性曲线图；

图3为对照试剂与本发明试剂盒稳定性检测结果；

图4为本发明与对照试剂重复性检测结果；

图5为本发明试剂盒与对照试剂盒临床检测结果。

具体实施方式