[发明专利]一种脱细胞羊膜粉的制备方法

说明书

本发明公开了一种脱细胞羊膜粉的制备方法，包括1)、将羊膜清洗、剪碎；2)、在4℃的振荡器中洗涤12～24小时；3)、在4℃的振荡器中用1％的Triton x‑100和氢氧化铵洗涤1～3天；4)、在4℃的振荡器中用去离子水洗涤12～24小时；然后用PBS洗涤12～24小时；5)、‑80℃保存24小时，然后冻干；6)、低温环境下研磨成粉7)、消毒后‑80℃储存。本发明采用相对温和的脱细胞方法去除了羊膜的细胞并进行灭菌处理，整个过程中严格控制低温环境，对羊膜中的活性物质进行有效的保护；所制得的冷冻羊膜粉末可以制成羊膜胶或喷雾等多种形式，更有利于创面利用胶原与蛋白小分子，为创面愈合提供更有效的营养支持，其生长因子等活性物质可持续促上皮化。

技术领域

本发明涉及一种脱细胞羊膜粉的制备方法。

背景技术

羊膜是胎盘的最内层，包裹着羊水的光滑的、无血管、神经及淋巴、具有弹性一层生物半透膜；羊膜中存在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型胶原和纤维粘连蛋白、层粘连蛋白等多种蛋白成分及一些生长因子，如表皮细胞生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子(TGF)等，这些生长因子能促进上皮细胞的增殖、迁移、分化，增强上皮细胞的粘附性，促上皮化，减轻瘢痕；

羊膜可促进结膜干细胞分化为结膜上皮细胞、促进结膜上皮向角膜上皮转化，促进角膜缘干细胞增殖及提供一个有助于其生长的微环境，促进角膜上皮细胞移行、促进角膜基质胶原纤维增生、抑制结膜下纤维组织增生、抑制新生血管增生，具有抗炎、抗菌等功能；羊膜上皮细胞不表达hla-a、b、c、dr抗原或β2微球蛋白，表达ib抗原、限制ia抗原，这些特点使羊膜表达低抗原性；羊膜中含有多种胶原及蛋白成分，可以为创面愈合提供丰富的营养支持；

羊膜的生物学特性和医学研究均证明羊膜作为敷料应用于创面时相比其他很多人工合成敷料具有明显的优势；人羊膜上皮细胞不表达hla-a、b、c、dr抗原或β2微球蛋白，表达ib抗原、限制ia抗原，这些特点使羊膜表达低抗原性；羊膜的结构与羊膜中的胶原和多种活性物质不仅可以使羊膜发挥较好的屏障作用，而且还具有抗菌消炎、促愈合、减轻挛缩等作用；羊膜内的胶原、蛋白成分和活性因子，在作为敷料应用于伤口时营养成份的利用和活性因子的释放率可以加快创面愈合速度和提高创面愈合质量。但新鲜生物羊膜为单层结构，厚度薄，易卷曲折叠，滑动脱落，有效作用时间短，在应用创面时会有一定局限性；人们对新鲜羊膜做处理使其在保留天然优良性能的同时改良缺陷和不同，使其具有更大价值。

专利CN103114073B公布了一种人羊膜的脱细胞方法，采用表面活性剂TritonX-100、胰脂酶、DNA酶结合作用，属于化学与生物方法相结合的较彻底的脱细胞方法，但这类方法形成会导致蛋白成分和生长因子的大量流失，可做为较理想的组织工程的支架材料，但作为敷料应用于创面时的作用会大大下降；

专利CN200510046856.3公开了一种干燥活性羊膜的制备方法，可以将新鲜羊膜脱细胞后冷冻干燥，有延长了羊膜的保质期，随取随用的优点，但仍然是单层结构，厚度薄，质感脆，在不规则创面的应用上的适应性差。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的羊膜的脱细胞方法不够温和，同时具有抗原性和其他来源于供体的风险的缺陷，提供一种能适应不同创面的脱细胞羊膜粉的制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

1、一种脱细胞羊膜粉的制备方法,其特征在于，包括以下步骤：

1)、将新鲜的羊膜清洗，去除表面血迹，剪成碎片；新鲜的羊膜清洗时使用无菌水、无菌盐水或培养基；可将羊膜剪成面积为5×5cm的碎片，可以用无菌剪刀和镊子，手术刀或切片机，也可以按用途更改尺寸；新鲜的羊膜取自新鲜的胎盘，可以是人源，也可以是动物源；

2)、在4℃的振荡器中用去离子水洗涤12～24小时,每4～6小时更换一次去离子水；