[发明专利]一种染黄羽鹌鹑肠道粘液细胞的Schiff氏法

说明书

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种染黄羽鹌鹑肠道粘液细胞的Schiff氏法。

背景技术

在动物消化道中,目前已发现和鉴定的胃肠激素肽多达20余种。它的基本结构是由氨基酸组成的直链多肽,其生物学作用取决于所含氨基酸的种类、数量及其序列顺序,不同胃肠激素对胃、肠、胰的液体分泌、运动、消化和吸收有着不同效应,但在相同顺序位置上相同的氨基酸越多,则功能越接近。

黄羽鹌鹑属隐性黄羽类型，黄羽鹌鹑幼雏和成鹑毛色所呈现的黄色特征清晰可辨。皮肤为白色,喙、胫、趾等均呈浅棕黄色且随月龄的增大而逐渐变淡；成年鹤鹑体型与中国白羽成年鹌鹑大小相似,与朝鲜栗羽相比体型稍小,体重稍轻。黄羽鹌鹑抗寒和抗病能力与朝鲜鹌鹑无显著差异(P0.05),但比中国白羽鹌鹑的抗寒搞病能力强,差异极显著。

现有的技术不宜着色或着色效果差。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种染黄羽鹌鹑肠道粘液细胞的Schiff氏法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种染黄羽鹌鹑肠道粘液细胞的Schiff氏法,包括如下步骤：

S1、称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中，轻微振荡，继续煮3min，充分溶解。然后冷却致50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml1mol/LHCl，冷却致25℃时，加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na₂S₂O₅)，充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h，待溶液红色褪去，呈现无色或淡黄，然后加入0.5g活性碳，用力振荡一分钟，最后用粗滤纸过滤于，得Schiff染液，存于棕色瓶中，封瓶塞，外包黑纸；滤液应为无色也无沉淀，贮于冷暗处(如4℃冰箱中)备用，可保持1年；

S2、选取鹌鹑十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结直肠中段1cm的组织样，置于Bouin氏液中固定，常规石蜡切片至水洗；Schiff染液染40min，水洗10min；用苏木精复染1min，分化，蓝化；最后水洗、脱水、透明、封片。染色结果为杯状细胞呈红色。

优选地，所述常规石蜡切片至水洗具体包括如下步骤：

(1)将保存于75％酒精中的组织取出，进行修样，冲洗；

(2)进行梯度酒精脱水：(体积百分比，下同)75％(4h)→85％(4h)→95％(2h)→100％I(1h)→100％II(1h)；

(3)将完成酒精脱水后的组织进行透明处理，二甲苯Ⅰ(1h)→二甲苯Ⅱ(1h)，到透明程度为琥珀色时，终止透明；

(4)将完成透明处理后的组织置于60℃的苯蜡中，浸2h；

(5)包埋处理：先倒入液蜡，让组织自然下沉，等蜡块凝固；

(6)将修剪好的组织蜡块固定到切片机上进行切片，切片厚度为4-6μm；将组织切片放入37℃烘箱，24h后取出，备用；

(7)脱蜡、复水：二甲苯Ⅰ(10min)→二甲苯Ⅱ(10min)→100％酒精I(5min)→100％酒精Ⅱ(5min)→95％酒精(4min)→85％酒精(3min)→75％酒精(3min)，用水缓慢冲洗5min。

苯蜡包括50％的二甲苯、50％的蜡。

本发明具有以下有益效果：

易着色且着色效果稳定。

具体实施方式

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实施例提供了一种染黄羽鹌鹑肠道粘液细胞的Schiff氏法,包括如下步骤：

S1、称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中，轻微振荡，继续煮3min，充分溶解。然后冷却致50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml1mol/LHCl，冷却致25℃时，加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na₂S₂O₅)，充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h，待溶液红色褪去，呈现无色或淡黄，然后加入0.5g活性碳，用力振荡一分钟，最后用粗滤纸过滤于，得Schiff染液，存于棕色瓶中，封瓶塞，外包黑纸；滤液应为无色也无沉淀，贮于冷暗处(如4℃冰箱中)备用，可保持1年；