[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定升麻中异阿魏酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定升麻中异阿魏酸含量的方法。

背景技术

2015年版药典记载了对升麻中异阿魏酸进行含量测定时所需供试品的制备方法如下所示：取本品粉末(过二号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入10％乙醇25ml，密塞，称定重量，加热回流2.5小时，放冷，再称定重量，用10％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。在15000r/min下离心3min，取上清液，进入LC测定。

但是该方法耗时较长，故导致效率较低。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种耗时可缩短几倍且不影响最终提取结果的ASE法提取升麻中异阿魏酸的方法，再将该方法与HPLC法结合，设定最佳参数，以准确测定升麻中异阿魏酸含量的方法。

为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定升麻中异阿魏酸含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE法用乙醇萃取粉碎后的升麻，并收集乙醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法测定乙醇萃取液中异阿魏酸的含量。

其中，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将升麻样品粉碎，过筛，取0.5g与1g石英砂混合均匀；

步骤S2：将步骤S1所得的混合物装于放有滤膜的10ml ASE萃取池中，并加石英砂至与池口平行；

步骤S3：用浓度为20％～40％的乙醇萃取，并用浓度为20％～40％的乙醇定容至50ml，离心，取上清液。

进一步的，步骤S3所述的萃取步骤的参数为：压力为1500psi，温度为130℃，时间为5～8min，次数为2～4次，冲洗体积为60％，吹扫时间为90s。

进一步的，步骤S3所述的萃取步骤的参数为：压力为1500psi，温度为130℃，时间为8min，次数为4次，冲洗体积为60％，吹扫时间为90s。

进一步的，步骤S3所述的离心步骤的参数为：速率为15000r/min，时间为3min。

进一步的，所述的步骤S1具体为：将升麻样品粉碎，过三号筛，取0.5g与1g石英砂混合均匀。

进一步的，所述的步骤S2具体为：将步骤S1所得的混合物装于放有玻璃纤维滤膜的10mlASE萃取池中，并加石英砂至与池口平行。

进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Thermo Syncronis C18；柱温为40℃；流速为0.5mL/min；流动相为乙腈-0.1％磷酸；检测波长为316nm。

其中，所述的色谱柱的规格为3*100mm，3μm。

其中，所述的流动相为体积比为13:87的乙腈-0.1％磷酸。

本发明具有下述优点：

1、ASE提取溶剂的选择：本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用10％乙醇回流2.5小时。本实验选用20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示乙醇溶液的浓度与含量的关系不大，故采用的提取溶剂为40％乙醇。

2、ASE提取条件的优化：本发明采用对一个4因素3水平的正交试验，并且萃取液收集到不同的收集瓶中以考察静态循环次数(2次、3次、4次)，考察了萃取温度(100℃、120℃、30℃)、静态萃取时间(5min、8min、10min)等条件下的萃取效果，乙醇与水比例(1：5、2：5、3：5)结果在提取温度130℃，提取时间5min，循环次数2次的条件下，可达到与药典含量接近。正交表中可获知时间和温度是萃取结果最大的影响因素，所以，获得最优结果的提取工艺组合为温度130℃，提取时间8min，提取次数4次。

3、通过HPLC法对乙醇萃取液中异阿魏酸含量的测定，结果表明，本发明所设定色谱参数使含量测定的重复性良好、精密度高、稳定性好。

4、本发明所测得的异阿魏酸在4～80ng范围内呈良好的线性关系。

5、本发明提高了温度，降低了溶剂的黏度，减少了溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加。

6、由于液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力，故萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态。

附图说明

图1为以异阿魏酸的浓度(ng)-峰面积进行线性回归图；

图2为异阿魏酸对照品的色谱图；

图3为药典方法提取所得的供试品的色谱图；