[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定仙茅中的仙茅苷含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定仙茅中仙茅苷含量的方法。

背景技术

2015年药典记录了取本品粉末(过三号筛)约1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

液相色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液(21：79)为流动相；检测波长为285nm。理论板数按仙茅苷峰计算应不低于3000。

药典的方法操作过程复杂，对操作人员的操作技能要求高。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种ASE-HPLC法测定仙茅中仙茅苷含量的方法，该方法将ASE萃取与HPLC检测进行结合，并将药典方法中流动相的体积比进行了优化，以达到更好的实验效果。

为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定仙茅中仙茅苷含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE法用甲醇萃取仙茅粉末，并收集甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中的仙茅苷含量，其中，采用的流动相为乙腈-0.1％磷酸。

优选地，所述的步骤1具体包括下述子步骤：

步骤S1：将仙茅样品粉碎，过三号筛，取1g与0.5g硅藻土混合；

步骤S2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的10ml ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；

步骤S3：用甲醇萃取，萃取结束后，用甲醇将萃取液定容至50ml，在15000r/min下离心5min，取上清液。

优选地，步骤S3所述的萃取参数为：温度为90℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为60s。

优选地，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Thermo Syncronis C18，3*100mm，3μm；柱温为40℃；流速为0.5mL/min；流动相为体积比等于19：81的乙腈-0.1％磷酸；检测波长为285nm。

本发明与传统方法相比，具有以下优点：

1、本发明提高了温度降低溶剂的黏度，减少了溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；

2、由于液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力，故萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态。

3、采用本发明所述的检测方法测定仙茅苷对照品在0.0102～0.0612μg范围内呈良好的线性关系；

4、本发明所述的ASE提取方法重复性良好；

5、本发明考察了甲醇、乙酸乙酯、乙醇，以提取率高低、杂质多少为依据选出较佳溶剂，结果显示甲醇提取率最高，依次到乙醇、乙酸乙酯；乙醇提取率高于药典，但峰型差；乙酸乙酯萃取液需蒸干定容后才能测定，操作较为繁琐；所以选择甲醇作为提取溶剂；

6、本发明采用3因素3水平正交试验考察了对提取效率影响较大的三个因素：萃取温度、静态萃取时间、循环次数，通过试验结果，确定较优的ASE参数，结果显示：萃取温度对仙茅苷的含量影响最大，其次是循环次数和静态萃取时间；最终确定较佳ASE参数为萃取温度90℃，静态萃取时间5min，循环提取2次。

附图说明

图1为以仙茅苷对照品的浓度(μg)-峰面积进行线性回归图；

图2为仙茅苷对照品的色谱图；

图3为采用药典方法测定的样品色谱图；

图4为采用ASE-HPLC法测定的样品色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次修改，仍在本发明的权利要求保护范围内。

实施例1

1、仪器设备及试剂

1.1仪器：

电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。

1.2试剂：

水：符合GB/T 6682规定的一级水；

乙腈(C₂H₃N)：色谱纯；