[发明专利]一种壮腰健肾丸微中生物限度的检查方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物限度检查方法，尤其是一种壮腰健肾丸微中生物限度的检查方法，属于化学检测技术领域。

背景技术

壮腰健肾丸具有壮腰健肾、养血、祛风湿的作用，用于治疗肾亏腰痛、膝软无力、小便频数、风湿骨痛、神经衰弱。药品中的成分含有狗脊、黑老虎、千斤拔、桑寄生(蒸)、女贞子(蒸)、鸡血藤、金樱子、牛大力、菟丝子(盐水制)等。根据其用药途径和制法，应进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定，及控制菌——大肠埃希菌、耐胆盐革兰阴性菌、沙门氏菌的检查。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种操作简单，检测结果准确可靠的壮腰健肾丸微中生物限度的检查方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是这样的：

一种壮腰健肾丸微中生物限度的检查方法，依次包括下述步骤：

1)菌液制备

2)供试液制备

3)方法建立及回收率试验

常规法：

试验组：吸取1:10供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；

菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；

供试品组：吸取1:10供试液1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；

稀释剂组：吸取胰酪大豆胨液体培养基1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基。

各平皿倾注规定的琼脂培养基，待凝固后，分别置规定温度培养3－5d，测定需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数，计算其回收率。

4)控制菌检验方法的建立及验证

4.1)菌悬液制备

取含菌量为1000～10000cfu/ml的铜绿假单胞菌悬液，用0.9％无菌氯化钠溶液稀释制成含菌数为10～100cfu/ml的菌悬液，备用。

取经33℃培养24h的大肠埃希菌、铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为10～100cfu/ml的菌悬液，备用；

4.2)供制备试液

4.3)试验方法：

取供试品组样品做大肠埃希菌、耐胆盐革兰阴性菌和沙门氏菌检查；

取供试品组样品，加入相应的阳性菌菌液1ml进行培养，作大肠埃希菌、耐胆盐革兰阴性菌和沙门氏菌检查；

取稀释液10ml做大肠埃希菌、耐胆盐革兰阴性菌和沙门氏菌检查，作为阴性对照。

优选的，上述的一种壮腰健肾丸微中生物限度的检查方法，所述的菌液制备的制备方法为：取经33℃培养24h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养液及25℃培养24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为1000～10000cfu/ml的菌悬液，备用；取经25℃培养7天的黑曲霉沙氏葡萄糖琼脂斜面，加入5ml含0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，用带有棉花的球形吸管吸出孢子悬液，用含0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液制成含孢子数为1000～10000cfu/ml的孢子悬液，备用。

优选的，上述的一种壮腰健肾丸微中生物限度的检查方法，所述的供试液的制备方法为：取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇30min，混匀，作为1:10供试液。

优选的，上述的一种壮腰健肾丸微中生物限度的检查方法，所述的大肠埃希菌的制备方法为：取1：10供试液10ml接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，33℃培养24h。取培养物1.0ml，接种至100ml麦康凯液体培养基中，44℃培养24h，取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板，33℃培养24h，观察其菌落形态。