[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法。

背景技术

《中国药典》2015年版一部制备供试品方法为取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)适量，加热回流4小时，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转移至锥形瓶中，加入70％乙醇20ml，加热回流2小时，滤过，滤渣用70％乙醇5ml洗涤，合并洗液与滤液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

该方法回流时间长，对技术人员的专业水平要求较高。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种耗时短且能达到同样效果的ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE法对酸枣仁粉末进行萃取，其中所述的ASE法包括先用正己烷，再用甲醇萃取，并收集甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法对甲醇萃取液中的斯皮诺素含量。

优选地，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将酸枣仁样品粉碎，过筛，取1g与1g硅藻土混合均匀；

步骤S2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的10ml ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；

步骤S3：用25ml正己烷萃取除杂，再用25ml甲醇萃取，用甲醇定容至50ml。

优选地，步骤S3所述的除杂步骤的参数为：温度为80℃，时间为8min，次数为1次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。

优选地，步骤S3所述的萃取步骤的参数为：温度为100℃，时间为8min，次数为1次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。

优选地，步骤1所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Thermo AQ；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为乙腈-水；检测波长为335nm。

优选地，所述的色谱柱的规格为1.7μm，50×2.1mm。

优选地，所述的流动相采用梯度洗脱的方法加入，其中具体的参数如下：

洗脱总时间为30min；

第0～10min，流动相中乙腈-水的体积比为12～19：88～81；

第10～16min，流动相中乙腈-水的体积比为19～20：81～80；

第16～22min，流动相中乙腈-水的体积比为20～100：80～0；

第22～30min，流动相中乙腈-水的体积比为100：0。

本发明与传统方法相比，具有以下优点：

1、本发明提高了温度降低溶剂的黏度，减少溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；

2、由于液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力，所以萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态；

3、本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，有论文提到使用70％乙醇提取斯皮诺素相对含量较高，杂质较少，故对使用甲醇和70％乙醇进行了溶剂考察，结果显示甲醇与70％乙醇提取斯皮诺素含量一致，且杂质峰基本相同，故采用甲醇提取溶剂；

4、本发明主要考察萃取次数对结果的影响，实验中用ASE单次萃取的方法对样品重复提取三次，分别接收每次的样品液，分析其结果，结果表明萃取一次几乎完全，故萃取次数采用1次以节省时间；

5、本发明所述的ASE提取方法的重复性良好。

附图说明

图1为斯皮诺素对照品的色谱图；

图2为采用ASE法萃取所得的斯皮诺素的色谱图；

图3为采用药典方法萃取所得的斯皮诺素的色谱图；

图4为以斯皮诺素对照品的浓度(mg)-峰面积进行的线性回归图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求书做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次修改，人在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

1、仪器设备及试剂

1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。

1.2试剂：

水：符合GB/T 6682规定的一级水；