[发明专利]一种同时检测多种真菌毒素的方法

权利要求书

1.一种同时检测多种真菌毒素的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

步骤一：样品提取

将25g样品加入到100mL提取剂中，振荡离心，得到残渣和样品的上清液；向所述残渣中加入体积比为800:200的甲醇和纯水，振荡离心，取残渣的上清液；将所述样品的上清液与所述残渣的上清液混合为上清液；所述提取剂为按照体积比为800:10:190的乙腈、乙酸和纯水混合溶液；

按照体积比为10:70的比例混合所述上清液和稀释液，然后用滤纸过滤，得到提取液；所述稀释液为按照浓度比为0.8％:0.02％:0.02％:0.116％的NaCl、KCl、KH₂PO₄和Na₂HPO₄·12H₂O的混合水溶液；

步骤二：提取液净化

取所述步骤一中的提取液缓慢通过复合免疫亲和柱并排干，然后用水洗涤两次；再用体积比为2:98的乙酸和甲醇的混合液对复合免疫亲和柱进行至少两次的梯度洗脱，并收集从复合免疫亲和柱流出的洗脱液；

将所述洗脱液用氮气吹干，并用50％甲醇溶液定容，得到待测液；

步骤三：建立标准曲线

用50％甲醇溶液配制一系列包含待检测的多种真菌毒素组分的标准混合溶液，采用液相色谱质谱联用同时检测所述标准混合溶液中的真菌毒素，建立相应的标准曲线；

步骤四：检测待测液

采用液相色谱质谱联用同时检测所述步骤二中待测液中的真菌毒素的含量，根据所述步骤三中建立的标准曲线进行定量分析；依据所述步骤三中标准溶液的质谱峰面积和浓度分别绘制每种真菌毒素的标准曲线，依据所述待测液的峰面积用外标法求出所述待测液中真菌毒素的浓度，根据所述待测液中真菌毒素的浓度计算出样品中真菌毒素的含量。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测多种真菌毒素的方法，其特征在于：所述样品中真菌毒素的含量的计算方法为：其中X为样品中真菌毒素的含量，单位为μg/kg；c为提取净化液中真菌毒素的浓度，单位为μg/L；V为加入提取液的体积，单位为mL；m为样品质量，单位为g；f为提取液稀释因子。

3.根据权利要求1所述的一种同时检测多种真菌毒素的方法，其特征在于：所述滤纸为微纤维滤纸。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测多种真菌毒素的方法，其特征在于：所述液相色谱质谱联用同时检测标准混合溶液或者待测液中真菌毒素的含量的液相条件：流动相A:甲醇；流动相B：体积比为0.1％甲酸和1mmol/L乙酸铵的水溶液。

5.根据权利要求1所述的一种同时检测多种真菌毒素的方法，其特征在于：所述液相色谱质谱联用同时检测标准混合溶液或者待测液中真菌毒素的含量的超高压液相色谱条件：色谱柱：C18，100*2.1mm，粒径1.6～1.8μm；柱温40℃，进样量为4μL，流速为0.3mL/min。

6.根据权利要求1所述的一种同时检测多种真菌毒素的方法，其特征在于：所述液相色谱质谱联用同时检测标准混合溶液或者待测液中真菌毒素的含量的质谱条件：电喷雾离子源，多重反应监测模式。