[发明专利]一株猪链球菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，特别涉及一株猪链球菌及其应用。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus Suis,SS)是国家规定的一种二类动物疫病，它是一类人畜共患的急性、热性的传染性疾病，是引起猪链球菌病的主要病原，主要引起猪脑膜炎以及败血症等疫病。根据猪链球菌的荚膜多糖抗原可将之分为35个血清型，即1～34型和1/2型。对猪致病性较强的是1型、2型、1/2型、7型和9型。其中猪链球菌2型是流行最广、致病性最强的血清型，其次是9型、7型、1型。近几年来，猪2型链球菌引起的猪链球菌病呈上升趋势。该病以急性败血症为主，发病急，死亡快，给养猪业造成巨大的经济损失，并且猪2型链球菌可以引起了人的感染和死亡。另外，该病经常与猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征、猪的附红细胞体病以及非典型猪瘟混合感染，所以一旦发生此病将很难控制，从而给养殖户造成重大经济财产损失，给我国养猪业的发展带来巨大的困难。因此该病的研究对畜牧业及公共卫生业上均有重要意义。

国内外研究认为猪链球菌的致病性与其毒力因子有密切关系，目前研究较多的猪链球菌主要毒力因子有荚膜多糖(capsular polysaccharide，CPS)、溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein，MRP)、胞外因子(extracellular protein fateror，EF)和溶血素(suilysin，SLY)。在先研发的很多药物对猪链球菌病都能起到很好的治疗效果，但是随着养殖规模发展，大量抗菌药物的使用，休药期药物的不合理使用，都造成病原菌的耐药现象越来越严重，越来越不利于临床疾病的预防和治疗。因此亟需研发一种新的具有较好免疫原性的菌株制备的疫苗。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一株猪链球菌及其应用，该菌株毒力强，制备的疫苗免疫性好。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一株猪链球菌，所述的猪链球菌为猪链球菌(Streptococcus suis)HNSS1，保藏编号：CGMCC NO：13334，保藏日期：2016年11月22日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

所述的猪链球菌为猪链球菌2型。

一种猪链球菌在制备猪链球菌灭活疫苗方面的应用。

所述的猪链球菌灭活疫苗中，猪链球菌菌量为1×10⁹CFU/mL。

所述的猪链球菌灭活疫苗的制备方法为：将所述的猪链球菌依次经过培养、收获和灭活得到疫苗原液后，加入佐剂即得疫苗。

所述的佐剂为氢氧化铝佐剂。

所述的猪链球菌灭活疫苗的制备方法为：将猪链球菌接种到TSB液体培养基，置于37℃摇床中培养，18h后收取培养物，测定浓度，调整培养物中的菌数为2×10⁹CFU/mL，加入甲醛至终浓度为0.2％，于37℃灭活12h；灭活后的培养物按体积比1:1加入氢氧化铝佐剂，混合制得猪链球菌灭活疫苗。

本发明的有益效果：

1、本发明中的菌株HNSS1分离自发生典型呼吸道症状及神经症状死亡的保育猪的脑组织，在TSA固体培养基上分离时无其它细菌生长，只有猪链球菌生长，在TSB液体培养基中增殖滴度高，达10⁹CFU/mL以上。

2、本发明中的菌株HNSS1对保育猪具有较强的致病力，引起保育猪发病死亡，具有良好的免疫原性。

3、根据本发明中的菌株HNSS1制备的疫苗对猪的猪链球菌病具有较好的保护效果。

附图说明

图1为菌株HNSS1菌落形态。

图2为菌株HNSS1菌体革兰氏染色100×显微镜下形态。

图3为菌株HNSS1的PCR鉴定结果，图中的Marker为DL 2000bp，从上到下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp，100bp；1为引物SS1，SS2扩增gdh基因结果；2为引物SS3，SS4扩增cps2J基因结果；3为引物mrp1，mrp2扩增mrp基因结果；4为引物sly1，sly2扩增sly基因结果；5为引物epf1，epf2扩增epf基因结果。从图可以看出，所分离株鉴定为2型猪链球菌，并且毒力因子的基因型为sly⁺mrp⁺epf⁺。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。