[发明专利]鼠抗人CD61单克隆抗体杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其制备方法和应用、流式检测试剂

说明书

本发明公开了一种鼠抗人CD61单克隆抗体杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其制备方法和应用、流式检测试剂，属于生物工程技术领域。本发明以人外周血白细胞为免疫原免疫Balb/c小鼠，采用细胞融合技术，利用免疫细胞化学和流式间接免疫荧光法筛选杂交瘤细胞，应用免疫沉淀‑质谱法对单克隆杂交瘤细胞产生的抗体进行特异性鉴定，经Western Blot验证，获得一株能稳定分泌鼠抗人CD61单克隆抗体的杂交瘤细胞株ⅡD5G8，保藏编号为CGMCC No.13300。采用动物体内诱生法制备单抗，鉴定抗体重链为IgG1，轻链为kappa型，抗体纯化后经FITC标记可用于流式直标免疫荧光检测人外周血血小板CD61抗原表达。

技术领域

本发明涉及一种鼠抗人CD61单克隆抗体杂交瘤细胞株，同时还涉及由该杂交瘤细胞株分泌产生的鼠抗人CD61单克隆抗体和FITC标记的单克隆抗体，以及上述单克隆抗体的制备方法和应用，此外还涉及包含上述单克隆抗体的流式检测试剂，属于生物工程技术领域。

背景技术

CD61别名CD61A、GPIIb/IIIa或整合素β3链，分子量为110kDa，表达于血小板、巨核细胞及巨噬细胞上。CD61属于整合素β亚单位，其配体及相关分子式纤维连接蛋白、纤维蛋白原、纤维蛋白溶酶原、凝血酶原、TSP、玻璃连接蛋白、vWF、腱生蛋白、MMP-2、层黏蛋白及骨桥蛋白。

CD41/CD61是血小板活化时出现的玻璃连接蛋白、纤维原蛋白、纤维蛋白、vWF的受体，与血小板凝集有关、CD51/CD61是玻璃连接蛋白、纤维蛋白原、纤维蛋白、vWF、TSP的受体，与细胞的粘附反应相关。临床上可用于Glanzmann血小板无力症、巨核细胞白血病、特发性血小板减少性紫癜的诊断。

公布号CN101200708A的发明专利公开了鼠抗人CD41单克隆抗体杂交瘤细胞株CGMCC NO.2177，由该杂交瘤细胞株分泌的鼠抗人CD41单克隆抗体能够识别CD41与CD61结合后的构象抗原部位，非还原状态下与GPIIb/IIIa复合物免疫共沉淀，作为抑制性抗体能够抑制ADP、胶原和HIP2等引起的聚集作用，但是对Ristocetin引起的聚集没有影响，该抗体可用于涉血小板类血液病及血栓类疾病的诊断和治疗。公布号CN101307109A的发明专利公开了鼠抗人T淋巴细胞CD3表面抗原单克隆抗体，由抗T淋巴细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株CCTCC NO:C200803分泌，该抗体能够与已知的OKT₃及WuT₃单克隆抗体识别抗原的不同表位，对正常骨髓粒-巨噬祖细胞(CFU-GM)体系生长有明显的激活作用，且表现双向调节作用特征。目前，现有技术中还未有鼠抗人CD61单克隆抗体杂交瘤细胞株的公开文献。

发明内容

本发明的目的是提供一种鼠抗人CD61单克隆抗体杂交瘤细胞株，由该杂交瘤细胞株分泌的鼠抗人CD61单克隆抗体经FITC标记后可用于流式直标免疫荧光检测人外周血血小板CD61抗原的表达。

其次，本发明提供一种由上述杂交瘤细胞株分泌的鼠抗人CD61单克隆抗体及其制备方法。

同时，本发明提供一种FITC标记的鼠抗人CD61单克隆抗体及其制备方法。

再次，本发明提供一种鼠抗人CD61单克隆抗体、FITC标记的单克隆抗体在流式直标免疫荧光检测人外周血血小板CD61抗原表达中的应用。

最后，本发明提供一种包含上述鼠抗人CD61单克隆抗体或者FITC标记的单克隆抗体的流式检测试剂。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

鼠抗人CD61单克隆抗体杂交瘤细胞株，名称为ⅡD5G8，保藏编号：CGMCCNo.13300，保藏日期：2016年12月05日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。