[发明专利]一种偶数DNA分子量标准及其制备方法

权利要求书

1.制备本发明中200bp ladder 的技术体系由两种人工构建和全基因合成的核酸重组载体p2186和 p1000构成。

2.p2186适用于核酸发酵和限制性内切酶完全酶切。

3.p1000适用于作PCR模板，扩增获得具有复合结构的PCR产物，获得的扩增产物再进行限制性内切酶消化。

4.根据权利要求1所述的重组载体p2186，其特征在于，其中包含1个拷贝的2000bp、1000bp 、800 bp、600bp 4种 DNA片段，经过酶切，从而产生含有4种DNA片段的混合物-Mix1。

5.根据权利要求1所述，重组载体p1000，其特征在于其中含有5个重复的200bp DNA片段，每两个重复单位之间均存在EcoRI酶切位点，经过PCR扩增获得的1000bp DNA 片段经过酶切，可以产生200bp、400bp、600bp、800bp和1000bp的5种DNA片段混合物-Mix2。

6.根据权利要求1和2所述，重组载体p2186酶切所采用的限制性内切酶为EcoRI，所采用的酶切方式为完全酶切。

7.根据权利要求1和3所述，重组载体p1000 扩增产物所采用的限制性内切酶为EcoRI，所采用的酶切方式为部分（不完全）酶切。

8.根据权利要求1、2和3所述，该200bp DNA ladder的制备方法，其特征在于包括以下3个过程：（1）重组载体p2186进行核酸发酵、质粒提取、纯化及EcoRI完全酶切，获得Mix1；（2）以p1000为模板，进行特异性PCR扩增，所得扩增产物经EcoRI部分酶切，获得Mix2。

9.（3）以适当的比例调配Mix1和Mix2，得到成品。

10.根据权利要求1-6所述， 本发明中所制备的DNA ladder组成为：200bp、400bp、600bp、800bp、1000bp、2000bp，共6种DNA片段。