[发明专利]快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法。针对现有提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法耗时长等问题，本发明提供一种快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法，步骤如下：a、将冬虫夏草菌菌种接种于培养基中，培养10～20d后，过滤，收集菌丝沉淀；b、取菌丝沉淀0.5～1g,加入蒸馏水2～10ml，分散器打碎菌体，离心后弃上清；加入磷酸氢二钾溶液，离心弃上清；再加入磷酸氢二钾震荡成均匀悬浮的菌液，加入混合酶液,震荡混匀、煮沸，再于冰上放置5～30min,离心，即得。本发明方法专用于冬虫夏草菌，在提取时可排除其他杂菌的干扰，DNA纯度高；并且，本发明耗时短，现有的CTAB法耗时4‑6h，本发明耗时仅为1.5h左右。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法。

背景技术

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis是我国一种传统的名贵中药材，是一种昆虫与真菌的结合体。是我国一种传统的珍贵中药材。野生冬虫夏草仅分布于青藏高原及周边地区海拔 3000m以上、雪线以下的地区，在我国的分布包括西藏、青海、四川、云南、甘肃5省区的高寒草甸草原。《中华人民共和国药典》自1963年版直到目前的2015年版都对冬虫夏草进行了收录，2015年版药典记载其“甘，平。归肺、肾经。补肾益肺，止血化痰。用于肾虚精亏，阳痿遗精，腰膝酸痛，久咳虚喘，劳嗽咯血”。

迄今为止，有关冬虫夏草菌的研究越来越侧重于人工培育的方法，借助于分子生物学手段的实验也越来越多。在研究其交配型基因的表达或产物时首先需要获得冬虫夏草菌的基因组DNA，才能进行下一步实验。

现有技术提取冬虫夏草菌的基因组DNA的方法主要为CTAB法，该方法提取的DNA可用于基因扩增、全基因组测序或其他对基因组DNA要求较高的分子生物学试验中。但CTAB法耗时长，需要的仪器设备多，设备要求高，提取成本较高。

发明内容

本发明要解决的技术问题为：现有提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法耗时长、设备要求高、生产成本高等问题。

本发明解决技术问题的技术方案为：提供一种快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法。该方法包括以下步骤：

a、冬虫夏草菌菌体培养与收集

将冬虫夏草菌菌种接种于培养基中，培养10～20d后，过滤，收集菌丝沉淀；

b、冬虫夏草菌基因组DNA的提取

取步骤a所得菌丝沉淀，加入蒸馏水，打碎菌体，离心后弃上清；加入磷酸氢二钾溶液，离心弃上清；再加入磷酸氢二钾震荡成均匀悬浮的菌液，加入混合酶液,混合酶液为蜗牛酶和纤维素酶的混合液,震荡混匀0.5～3h，煮沸5～30min，再于冰上放置5～30min，离心，上清即为冬虫夏草菌基因组DNA。

其中，上述快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法中，步骤a中所述的培养基组成为：每升培养基中含马铃薯80～300g，葡萄糖20～50g，蛋白胨5～20g,酵母提取物1～10g,磷酸氢二钾0.1～5g，硫酸镁0.1～5g，余量为水。

其中，上述快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法中，步骤a中所述培养的培养温度为 10～25℃，培养时置于转速为100～250r/min震荡摇床中进行。

其中，上述快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法中，步骤b中所述的离心是指在6000～ 10000r/min离心5～10min。

其中，上述快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法中，步骤b中所述蒸馏水加入量为每 0.5～1g菌丝沉淀中加入蒸馏水2～10ml。

其中，上述快速提取冬虫夏草菌基因组DNA的方法中，步骤b中所述的磷酸氢二钾溶液浓度为0.01～0.1mol/L，加入量为每0.5～1g菌丝沉淀中加入2～10ml。