[发明专利]DNA过氧化物模拟酶在2-羟基芴化学发光检测中的应用

权利要求书

1.一种应用DNA过氧化物模拟酶的2-羟基芴化学发光检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将过氧化物模拟酶DNA酶与鲁米诺溶液混合并通过漩涡振荡器均匀；

(2)将待测样品2-羟基芴用缓冲溶液稀释后，与H₂O₂溶液混合均匀；

(3)将步骤(1)制备的混合溶液置于化学发光检测池内，然后将步骤(2)的混合溶液快速加入到化学发光检测池中，立即进行化学发光信号检测；

所述DNA过氧化物模拟酶中的DNA具有G-四联体核苷酸序列，

所述DNA过氧化物模拟酶中DNA的序列为PW17。

2.根据权利要求1所述的2-羟基芴化学发光检测方法，其特征在于，步骤(3)所得的混合发光体系中，DNA酶的浓度为1-300nM，鲁米诺的浓度为0.1-100μM，H₂O₂溶液的浓度为1-10mM。

3.根据权利要求1所述的2-羟基芴化学发光检测方法，其特征在于，所述DNA过氧化物模拟酶通过以下方法制备：

S1：将DNA用缓冲溶液溶解，用漩涡振荡器混匀，并于80-90℃的水浴中处理1-30min，取出，自然冷却，置于室温下自然冷却，备用；

S2：取步骤S1配制的DNA溶液加到离心管中，向其中加入缓冲溶液，孵育0.1-5h后，加入hemin，用漩涡振荡器混匀，放置0.1-10h，得到DNA过氧化物模拟酶。

4.根据权利要求3所述的2-羟基芴化学发光检测方法，其特征在于，所述的DNA过氧化物模拟酶中DNA与hemin的浓度比为1：1.0-1.5。

5.根据权利要求1～4任一项所述的2-羟基芴化学发光检测方法，其特征在于，构建的混合发光体系的pH值为7.5-12；所述缓冲溶液由Tris、KClO₄、磷酸、柠檬酸、盐酸、氯化钾、KH₂PO₄，K₂HPO₄中的二种或三种配制而得。

6.根据权利要求5所述的2-羟基芴化学发光检测方法，其特征在于，所述混合发光体系的pH值为8.5-10，所述缓冲溶液由Tris和KClO₄配制而得。

7.根据权利要求1～4任一项所述的2-羟基芴化学发光检测方法，其特征在于，利用标准梯度浓度的2-羟基芴制备混和发光体系，进行化学发光信号检测，构建标准曲线，将待测样品的检测值带入计算，对待测样品的2-羟基芴污染物进行定量分析。