[发明专利]一种洛伐他汀高产红曲菌及其高通量筛选方法

说明书

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种洛伐他汀高产红曲菌及其高通量筛选方法。本发明所述的高通量筛选方法具有操作步骤简单、通量高、准确性高及设备投入少等特点，该方法经稍加改变，即可用于其它次级代谢产物的生产菌株的高通量筛选。本发明所述红曲菌Monascus anka Mon20‑2(CCTCC M2015356)的洛伐他汀含量高，应用本发明公开的发酵工艺，在规模生产中洛伐他汀产量可达2952.0mg/L，远优于现有技术报道。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种洛伐他汀高产红曲菌及其高通量筛选方法。

背景技术

红曲菌(Monascus spp.)是一属小型丝状腐生真菌，属子囊菌亚门(Ascomycotina)不整囊菌纲(Plectomycetes)散囊菌目(Eurotiales)红曲科(Monascaceae)，在该科下，仅有红曲菌一个属，为法国学者Van Tieghem于1884年建立。主要种类有红曲菌(M.anka)、烟色红曲菌(M.fuliginosus)、紫红曲菌(M.purpureus)和红色红曲菌(M.ruber)等。

红曲菌能够产生醇、醋、酸等多种芳香物质一级代谢产物和多种水解酶类，使发酵食品产生优质香气和甘甜味道，也是绝佳的酿酒材料。尤其是其所产生的次级代谢产物如色素、抗生素、胆固醇抑制剂、中药成分等近年来更是成为人们研究的热点。其中最主要的生物活性代谢产物是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂洛伐他汀(Lovastatin)，又称为Monacolin K。洛伐他汀能够显著降低胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平，具有良好的降血脂作用，而且不存在胆固醇类物质蓄积，在治疗量下不会影响细胞膜正常功能所需要的胆固醇量，不良反应较小。

由于野生红曲菌菌洛伐他汀的生产水平一直很低，近年来，航天诱变育种已成为空间生命科学研究的重要内容之一，经过航天诱变后，空间环境的强辐射、失重、高洁净、高真空等多种诱变因素为人类提供了地面无法比拟的诱变条件。在多种因素协同作用下主要发生的是生物学特性发生变化，诱变的红曲菌菌洛伐他汀的含量有可能提高，不变，或者降低，因而需要对诱变菌株进行筛选。然而，现有洛伐他汀高产红曲菌的筛选大多基于摇瓶试验，该方法人力、物力投入大，效率低，无法满足实际生产的需要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种洛伐他汀高产红曲菌的高通量筛选方法及其高产洛伐他汀的工艺，解决现有技术中产洛伐他汀红曲菌的诱变后筛选过程复杂，筛选效率低等问题，以及现有红曲菌的洛伐他汀产量较低的问题。

为解决的上述技术问题，本申请公开了一种红曲菌Monascus anka Mon20-2(CCTCC M2015356)。本发明所述红曲菌Monascus anka Mon 20-2由亲株红曲菌30192(购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，菌株号ACCC 30192)，经“神州八号”航天飞船搭载，进行太空诱变后筛选获得，已于2015年6月4日在中国典型培养物保藏中心(中国，武汉)保藏，保藏号CCTCC M2015356。

另一方面，本申请还公开了上述红曲菌在生产洛伐他汀的用途。

另一方面，本发明公开了一种高产洛伐他汀红曲菌诱变菌株的高通量筛选方法，所述方法为：

用接种铲将种子培养基平皿中活化后诱变菌株菌落刮下，接入含初筛发酵培养基的深孔板中，27℃、180rpm摇床培养7天；

将装有发酵液的深孔板在4000rpm离心5分钟，取上清液0.2ml，调pH至3.0左右，加入等体积乙酸乙酯，50℃、150rpm水浴摇床萃取2小时，3000rpm，离心5分钟，取上清液至新离心管中，用真空干燥泵抽干溶剂；

结晶用0.5-1mL甲醇溶解，离心取上清，适当稀释后，于237nm处测其紫外吸光值；