[发明专利]L-半胱氨酸的生物转化方法在审
| 申请号： | 201710219501.2 | 申请日： | 2017-04-06 |
| 公开（公告）号： | CN108690855A | 公开（公告）日： | 2018-10-23 |
| 发明（设计）人： | 胡磊;徐灿;陈建华;胡鹏高 | 申请（专利权）人： | 武汉茵茂特生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P13/12 | 分类号： | C12P13/12 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430070 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丙氨酸 半胱氨酸 生物转化 底物 半胱氨酸脱巯基酶 生物转化反应 生物催化剂 取代反应 工艺流程 丙酮酸 对设备 转化液 提纯 溶剂 辅酶 铵盐 催化剂 添加剂 | ||
1.一种L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，包括：以3-氯-丙酮酸为底物与溶剂构成反应体系，再向所述反应体系中加入生物催化剂、辅酶、添加剂和铵盐进行生物转化反应，得到含有3-氯-L-丙氨酸的转化液，提纯，得到3-氯-L-丙氨酸晶体，再以所得的3-氯-L-丙氨酸晶体和硫氢化钠为底物，以L-半胱氨酸脱巯基酶为催化剂，通过β-取代反应生成L-半胱氨酸。
2.根据权利要求1所述的L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述生物催化剂为来源于Saccharomyces cerevisiae的3-氯-L-丙氨酸脱氢酶、来源于Candida boidinii的甲酸脱氢酶共表达的基因工程菌全细胞；所述辅酶为NADP+，所述铵盐为甲酸铵。
3.根据权利要求2所述的L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述来源于Saccharomyces cerevisiae的3-氯-L-丙氨酸脱氢酶、来源于Candida boidinii的甲酸脱氢酶共表达的基因工程菌中外源3-氯-L-丙氨酸脱氢酶的编码基因是序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；所述来源于Saccharomyces cerevisiae的3-氯-L-丙氨酸脱氢酶、来源于Candida boidinii的甲酸脱氢酶共表达的基因工程菌中外源甲酸脱氢酶的编码基因是序列表中SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述的溶剂为缓冲溶液，所述缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、Tri-HCl缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲溶液、MOPS缓冲溶液中的一种。
5.根据权利要求4所述的L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述添加剂为丁二醇、乳酸钠、葡萄皮提取粉和螺旋藻粉按重量比为3-5︰1.5-2.5︰1-3︰1组成的混合物。
6.根据权利要求5所述的L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述葡萄皮提取粉的制备方法为：将酿酒用葡萄剩余的皮渣经水洗，皮籽分离，所得葡萄皮在80℃下干燥6-8h后粉碎，过30目筛，得到葡萄皮提取粉。
7.根据权利要求6所述的L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，转化体系的pH值控制为6-8，控制所述转化体系的温度为20-50℃；所述转化反应在摇床中进行，所述摇床的转速控制为150-250r/min。
8.根据权利要求7所述的L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，转化体系的pH值控制为6-7，所述转化体系的温度控制为20-40℃；所述转化反应在摇床中进行，所述摇床的转速控制为180-220r/min。
9.根据权利要求7所述的L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述生物催化剂的浓度控制为10-30g/L；所述添加剂与生物催化剂的质量比控制为1-5％。
10.根据权利要求9所述的L-半胱氨酸的生物转化方法，其特征在于，所述生物催化剂的浓度控制为20-25g/L；所述添加剂与生物催化剂的质量比控制为2.5-5％。
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