[发明专利]抗体片段修饰的微梁制备方法和基于抗体片段修饰的微梁免疫传感检测系统

权利要求书

1.一种制备微悬臂梁的方法，包括以下步骤：

1)提供抗体和带有镀金层的微悬臂梁；

2)二硫键还原步骤：使用二硫键还原剂处理所述抗体，使得所述抗体铰链区的二硫键还原成巯基，从而得到两个对称的带有巯基的半抗体片段；

3)固定步骤：将步骤2)获得的半抗体片段与镀有金层的微悬臂梁结合，得到镀金表面上固定有所述半抗体片段的微悬臂梁。

2.一种制备微悬臂梁的方法，包括以下步骤：

1)提供抗体和带有镀金层的微悬臂梁；

2)酶解步骤：用蛋白酶将所述抗体裂解成F(ab’)₂片段和多个小分子片段，所述蛋白酶选自胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其组合；

3)二硫键还原步骤：使用二硫键还原剂处理所述F(ab’)₂片段，使得所述抗体铰链区的二硫键还原成巯基，从而得到两个对称的带有巯基的Fab’片段；

4)固定步骤：将步骤3)获得的Fab’片段与镀有金层的微悬臂梁结合，得到镀金表面上固定有所述Fab’片段的微悬臂梁。

3.一种制备微悬臂梁的方法，包括以下步骤：

1)提供抗体和带有镀金层的微悬臂梁；

2)二硫键还原步骤：使用二硫键还原剂处理所抗体，使得所述抗体铰链区的二硫键还原成巯基，从而得到两个对称的带有巯基的半抗体片段；

3)酶解步骤：用蛋白酶将所述半抗体片段裂解成Fab’片段和多个小分子片段，所述蛋白酶选自胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其组合；

4)固定步骤：将步骤3)获得的Fab’片段与镀有金层的微悬臂梁结合，得到镀金层上固定有所述Fab’片段的微悬臂梁。

4.一种应力传感元件，其包括基于应力的微悬臂梁，所述微悬臂梁的镀金层上固定有抗体的半抗体片段或Fab’片段，所述应力改变，从而导致微梁弯曲变形，通过光学或电学方法检测这种变形的过程，可得到免疫生化反应的实时信息。

5.一种基于应力的微悬臂梁免疫传感检测系统，其包括权利要求4的应力传感元件，所述应力改变，从而导致微梁弯曲变形，通过光学或电学方法检测这种变形的过程，可得到免疫生化反应的实时信息。

6.一种使用微悬臂梁传感检测系统免疫传感检测待测样品的方法，包括以下步骤：

1)提供对靶抗原特异的抗体和微悬臂梁传感检测系统，所述微悬臂梁传感检测系统包括反应池和带有镀金层的基于应力的微悬臂梁；

2)使用二硫键还原剂处理所述抗体，使得所述抗体铰链区的二硫键还原成巯基，从而得到两个对称的带有巯基的半抗体片段；

3)将步骤2)获得的半抗体片段与镀有金层的微悬臂梁结合，得到镀金层上固定有所述半抗体片段的微悬臂梁；

4)将步骤3)获得的固定有所述半抗体片段的微悬臂梁固定到微悬臂梁传感检测系统的反应池中；

5)将待测样品加入至步骤4)获得的微悬臂梁传感检测系统中，检测待测样品中是否存在所述靶抗原；

所述应力改变，从而导致微梁弯曲变形，通过光学或电学方法检测这种变形的过程，可得到免疫生化反应的实时信息。

7.一种使用微悬臂梁传感检测系统免疫传感检测待测样品的方法，包括以下步骤：

1)提供对靶抗原特异的抗体和微悬臂梁传感检测系统，所述微悬臂梁传感检测系统包括反应池和带有镀金层的基于应力的微悬臂梁；

2)用蛋白酶将所述抗体裂解成F(ab’)₂片段和多个小分子片段，所述蛋白酶选自胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其组合；

3)使用二硫键还原剂处理所述F(ab’)₂片段，使得所述抗体铰链区的二硫键还原成巯基，从而得到两个对称的带有巯基的Fab’片段；

4)将步骤3)获得的Fab’片段与镀有金层的微悬臂梁结合，得到镀金层上固定有所述Fab’片段的微悬臂梁；

5)将步骤4)获得的固定有所述Fab’片段的微悬臂梁固定到微悬臂梁传感检测系统的反应池中；

6)将待测样品加入至步骤5)获得的微悬臂梁传感检测系统中，检测待测样品中是否存在所述靶抗原；

所述应力改变，从而导致微梁弯曲变形，通过光学或电学方法检测这种变形的过程，可得到免疫生化反应的实时信息。