[发明专利]检测PITX1表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及检测PITX1表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用，属于生物技术领域，特别是涉及医学诊断领域。本发明中我们公开了检测PITX1表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用。可以通过对胃癌预后预测和胃癌化疗耐药评估进行标记，并利用免疫组化化学技术检测PITX1基因的表达水平，从而获得预测胃癌预后和化疗耐药的情况，且PITX1基因的引入方式简单，整个预测评估简便易行，可行性高。

技术领域

本发明涉及检测PITX1表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用，属于生物技术领域，特别是涉及医学诊断领域。

背景技术

胃癌是严重危害我国人民健康的疾病，到目前为止尚无较好的靶向药物，造成患者治疗效果差，预后不良。另外，胃癌是一个异质性很高的疾病，不同患者的病因不同，造成诊断和治疗上的差别。尤其是不同遗传基础，可能造成患者化疗用药的疗效差别。 目前国内外尚没有可以有效对这种化疗用药疗效差别进行预后判断的技术手段。

建立有效的术后预后预测标志物、发掘化疗耐药相关分子对于确证哪些患者术后可能出现复发转移并且需及时开展术后放化疗治疗，哪些患者对于化疗会产生抵抗，需要选择个体化治疗（如分子靶向治疗）具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对胃癌提供一种可靠的预后评估试剂盒，从而可以监控胃癌患者的预后情况，使其能够及时就诊；同时利用预后评估结果指定个体化治疗方案，合理应用化疗药物，避免无效的化疗，提高有效治愈率。

为了实现这一发明目的，我们公开了检测PITX1表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用。

胃癌细胞PITX1基因的表达水平与5氟尿嘧啶、顺铂等化疗药物的治疗效果有关，可以通过检测患者该基因的表达水平指导临床胃癌化疗用药，提高疗效。据此，我们提出PITX1基因检测可以应用于胃癌预后判定与化疗耐药评估。从而可以精确地预测胃癌预后，并且可以基于预测的预后有效地建立最佳的个体治疗方案，以显著减少由胃癌引起的死亡。

进一步地，我们公开了用于检测PITX1表达量的试剂（包括但不限于）选自：对PITX1具有检测特异性的探针、基因芯片或PCR引物。

更为具体地，在本发明中我们公开了对PITX1采用免疫组化方法检测。

利用免疫组化方法检测中我们所采用的检测试剂主要是由PITX1多克隆抗体、HRP标记二抗和组化试剂盒DAB显色剂组成。

其中多克隆抗体具体来说是指1:200 (Abcam，兔源性，ab72640)，HRP标记二抗是指DAKO、K5007即用型，组化试剂盒DAB显色剂是指DAKO、K5007, 1:100。

试剂盒中包含有检测生物样品中检测PITX1表达量的试剂，用于该检测的生物样品为福尔马林固定和/或石蜡包埋的胃癌组织。

所述的检测试剂盒，通过以下步骤用于胃癌的预后判断：（a）.检测生物样品中的PITX1表达量，（b）.根据（a）中检测到的PITX1表达量将结果分为低表达（或者为不表达）和高表达两种，（1）PITX1不/低表达患者：5-FU化疗同时辅以PITX1基因治疗（PITX1的引入并不会诱发胃正常上皮细胞毒性），同时因其预后差，要密切随访病人，及时复查相应的肿瘤指征及PDCD5的表达水平，合理调整化疗的剂量时间；（2）PITX1高表达患者：预后虽较不/低表达患者好，但其对5-FU易耐药，故一旦发现控制效果不明显，应及时更换其他化疗药物。

这里所说的低表达是指阴性、假阳性和弱阳性，高表达是指阳性和强阳性。

由于胃癌细胞PITX1基因的表达水平与5氟尿嘧啶、顺铂等化疗药物的作用效果有关，可以通过检测患者该基因的表达水平指导临床制定个体化的化疗方案，提高疗效。