[发明专利]表达天维菌素B的重组微生物、制备方法及其用途

权利要求书

1.一种表达天维菌素B的重组链霉菌，其中所述重组链霉菌中的milA1基因AT0结构域编码序列置换成红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea NRRL23338) eryA1基因AT0结构域编码序列；其中所述表达天维菌素B的重组链霉菌是将除虫链霉菌MA220中的milA1基因AT0结构域编码序列置换成红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraeaNRRL23338) eryA1基因AT0结构域编码序列而得到；并且所述milA1基因AT0结构域编码序列如SEQ ID NO: 1所示，所述eryA1基因AT0结构域编码序列如SEQ ID NO:3所示。

2.根据权利要求1的重组链霉菌，所述重组链霉菌只表达天维菌素B而不表达天维菌素A。

3.权利要求1或2所述的重组链霉菌用于生产天维菌素B的用途。

4.一种生产天维菌素B的方法，其包括培养权利要求1或2所述重组链霉菌，以及从培养物中回收天维菌素B。

5.一种构建权利要求1或2所述重组链霉菌的方法，所述方法包括：

(1) 提供待改造的除虫链霉菌MA220；

(2) 将所述待改造的除虫链霉菌MA220中的milA1基因AT0结构域编码序列置换成红色糖多孢菌 (Saccharopolyspora erythraea NRRL23338) eryA1基因AT0结构域编码序列；

其中所述milA1基因AT0结构域编码序列如SEQ ID NO: 1所示，所述eryA1基因AT0结构域编码序列如SEQ ID NO:3所示。

6.根据权利要求5的方法，其中所述置换是通过将DNA片段S导入到除虫链霉菌MA220中，使DNA片段S与出发菌MA220中的milA1基因发生同源重组而完成。

7.根据权利要求5或6的方法，其中所述eryA1基因AT0结构域编码片段包含eryA1中完整AT0结构域编码序列948bp核苷酸；编码序列如SEQ ID NO:3所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述milA1基因AT0结构域编码序列如SEQ ID NO:1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

8.根据权利要求7的方法，所述DNA片段S，自5’端到3’端分别为同源臂T1、eryA1基因AT0结构域编码片段和同源臂T2；所述同源臂T1和同源臂T2能与milA1基因的相应位置发生同源重组。

9.根据权利要求8的方法，所述同源臂T1与milA1基因AT0结构域的上游序列同源重组；所述同源臂 T2与milA1基因AT0结构域的下游序列同源重组。

10.根据权利要求9的方法，其中所述同源臂T1包括milA1基因编码序列5’端306bp核苷酸。

11.根据权利要求9的方法，其中所述同源臂T2包括milA1基因编码序列中端1360bp核苷酸。

12.根据权利要求8或9的方法，所述片段S的序列如SEQ ID NO:5所示。