[发明专利]利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法

说明书

本发明公开了一种利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法，包括以下步骤：火龙果干片粉碎后沸水浸提；浸提液冷却至室温后过滤，滤液依次进行浓缩、脱色素、脱蛋白，并再次进行浓缩，得浓缩液；在浓缩液中加入无水乙醇中进行沉淀，所得的沉淀物进行冷冻干燥，获得火龙果粗多糖；取0.25～0.35g火龙果粗多糖溶于25±5ml的双水相溶剂系统的下相中，并注入逆流色谱；对双水相溶剂系统的上相进行pH的调节，从而分别获得流动相Ⅰ、流动相Ⅱ、流动相Ⅲ；分别取流动相Ⅰ、流动相Ⅱ、流动相Ⅲ依次进行洗脱，收集每种流动相下相同比移值的洗脱液，将收集的3类洗脱液分别经浓缩、透析、冷冻干燥，从而分别获得3种火龙果多糖。

技术领域

本发明属于食品加工利用及功能性食品制造领域，主要应用色谱方法和化学方法从具有利用价值的或含有生物活性成分的生物材料中提取分离生物活性物质或功能性成分，为研究此成分的活性机理或开发新产品等提供技术支撑。

背景技术

火龙果(Hylocereus undulates Britt)被誉为“仙人果”、“吉祥果”，是一种营养丰富，老少皆宜的水果，含有多糖、有机酸、膳食纤维及钾、钙、镁、磷等多种营养成分。据报道，火龙果多糖在促进肠道蠕动、预防便秘等方面具有很好的功能。

功能性多糖的提取分离是开发功能性食品的关键。目前现有的关于多糖的提取制备方法主要是采用凝胶柱色谱、膜分离、离子交换色谱等方法，其局限性是所使用的材料(填料或膜)价格贵、成本高、速度慢，并且每次分离的量有限。因此，现有的多糖分离技术难以满足火龙果多糖的分离的需要。

目前已有应用逆流色谱分离海带多糖、香菇多糖、螺旋藻多糖的报道，但根据报道的逆流色谱分离条件和方法不适用于分离火龙果多糖。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种无污染、快速高效、成本较低的从火龙果中提取制备多糖的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法，包括以下步骤：

(1)将火龙果去皮后切片、冷冻干燥制成含水量≤0.05％的火龙果干片，将火龙果干片粉碎后沸水(100℃)浸提2～3h；

(2)将浸提液冷却至室温(10～30℃)后过滤，滤液依次进行浓缩、脱色素、脱蛋白，并再次进行浓缩，得浓缩液；

(3)在浓缩液中加入无水乙醇中进行沉淀，所得的沉淀物进行冷冻干燥，获得火龙果粗多糖；

(4)取0.25～0.35g火龙果粗多糖溶于25±5ml的双水相溶剂系统的下相中，并注入(缓慢注入)逆流色谱(例如选用HSCCC-1000型逆流色谱仪)；

所述双水相溶剂系统由以下质量含量的成分组成：4～6％聚乙二醇6000(PEG6000)、16～20％的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、7～9％的磷酸二氢钾(KH₂PO₄)、3～5％的硫酸钾(K₂SO₄)，以及作为余量的水；

双水相溶剂系统自然分层，从而形成双水相溶剂系统的上相、双水相溶剂系统的下相。

(5)、每500mL的双水相溶剂系统的上相中分别加入5.0mL 0.05M HCl溶液、5.0mL0.15M HCl溶液、2.78mL 0.01M NaOH溶液，从而分别作为流动相Ⅰ、流动相Ⅱ、流动相Ⅲ；

分别取300±30mL的流动相Ⅰ、流动相Ⅱ、流动相Ⅲ依次进行洗脱，流动相Ⅰ、流动相Ⅱ、流动相Ⅲ的流速均为3.0±0.2mL/min；

收集每种流动相下相同比移值的洗脱液，将收集的3类洗脱液分别经浓缩、透析、冷冻干燥，从而分别获得3种火龙果多糖。

备注说明：