[发明专利]一种抗肿瘤组合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于抗肿瘤药物技术领域，尤其涉及一种利用极耐热糖苷酶制备的抗肿瘤组合物及其制备方法和应用。

背景技术

三七为五加科人参属植物，是我国名贵中药材，根茎入药，有散瘀止血，消肿止痛的功能。皂苷是三七的主要有效成分，迄今为止，已从三七的不同部位分离得到70余种单体皂苷，包括人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1和三七皂苷R1等。其中，人参皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷R1为三七总皂苷的主要成分。这三种成分在抗疲劳、维持血液循环、改善心肌缺血、抗心律失常、镇静、抗衰老及抗肿瘤等方面均显示出一定的药理作用。

三七总皂苷的抗肿瘤作用具有高效、低毒、多靶点等特点。其中，人参皂苷Rb1具有抗疲劳、舒张血管、提高免疫力等活性；人参皂苷Rg1具有抗衰老、防止动脉粥样硬化、提高免疫力等活性；三七皂苷R1具有心血管保护、神经保护、改善微循环等活性；人参皂苷Rg3对肝癌、结肠癌、胃癌、肺癌、黑色素瘤、白血病等具有显著的抑制作用，并且大量研究表明，Rg3是最具开发潜力的人参皂苷类抗肿瘤化合物；人参皂苷Rh1对肝癌、结肠癌、神经胶质瘤、卵巢癌、白血病等具有抑制作用；人参皂苷CK对肺癌、膀胱癌、慢性粒细胞白血病、胃癌、乳腺癌、肝癌、鼻咽癌、大肠癌、脊髓瘤、结肠癌等具有抑制作用。经不同的糖苷酶水解，人参皂苷和三七皂苷可以转化为其相同母核的不同糖苷形式。因此，可以以功能为导向，定向水解三七皂苷主要成分母核的糖苷，制备抗肿瘤活性更强的三七皂苷提取物精深加工产品。

对于皂苷类物质的转化，有化学转化法和生物转化法。化学转化法因其反应剧烈、选择性差、副产物多等缺点而不被采用。生物转化具有反应条件温和，特异性好、分离纯化容易等特点，而受到青睐。由于三七总皂苷成分中主要包含葡萄糖苷(Rb1，Rg1和R1等)，因此，通过筛选葡萄糖苷酶有望实现三七总皂苷的去糖基转化。目前皂苷类物质的生物转化主要有微生物转化法和酶转化法，但还存在以下缺点：(1)通常是针对某一种皂苷进行微生物或酶的转化，还没有通过一种生物酶同时定向水解三七皂苷中富含的数种皂苷；(2)还没有以抗肿瘤的功能为导向，制备抗肿瘤活性更强的三七皂苷提取物的精深加工产品。(3)采用的生物酶活力、专一性、酶学特性还不能适应规模化、低成本的实际应用。因此，以功能为导向，利用酶学特性优异的生物酶对三七皂苷提取物进行精深加工意义重大，将显著提升三七及其提取物的附加值，拓宽和增强三七及其提取物在抗肿瘤方面的应用。

发明内容

解决的技术问题：针对上述现有技术缺陷和空白，本发明提供了一种抗肿瘤组合物及其制备方法和应用。

技术方案：一种抗肿瘤组合物，由β-葡萄糖苷酶降解三七总皂苷提取物而得。

上述β-葡萄糖苷酶来源于黑曲霉、里氏木霉、嗜热菌来源的微生物及其基因重组菌。

β-葡萄糖苷酶降解三七总皂苷提取物的转化条件为：底物浓度0.05-50mg/mL，β-葡萄糖苷酶用量为1～50U/mg，反应温度为30～95℃，反应2～4h。

上述抗肿瘤组合物在制备治疗乳腺癌、肺癌、结肠癌或肝癌药物中的应用。

一种抗癌药物，有效成分为上述的抗肿瘤组合物。

有益效果：本发明提供了一种反应条件温和、副产物少、工艺操作简单的三七总皂苷精深加工的生物制备方法，产品成分明确、质量可控。创制了一种抗肿瘤功效显著的三七总皂苷精深加工产品。本发明的三七总皂苷转化物对乳腺癌、肝癌、结肠癌、肺癌等肿瘤增殖的抑制作用明显优于三七总皂苷提取物。

附图说明

图1：三七皂苷R1结构式图；

图2：人参皂苷Rb1、Rg1、20-Rg3、Rh1结构式图；

图3：三七总皂苷提取物HPLC图谱；

图4：三七总皂苷提取物转化产物的HPLC图谱；

图5：三七总皂苷转化前后抗肿瘤活性比较图；

图6：三七总皂苷转化产物促进肿瘤细胞的凋亡图；

图7：三七总皂苷转化产物抑制AKT的磷酸化图。

具体实施方式

下面结合附图及具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

本发明的目的在于提供一种提高三七总皂苷抗肿瘤活性的生物酶转化法，该方法将β-葡萄糖苷酶用于三七总皂苷中数种主要皂苷的去糖基转化，提高三七总皂苷对乳腺癌、肝癌、结肠癌和肺癌的增殖抑制作用。