[发明专利]一种受低温和脱落酸诱导的启动子S6PDHp3及其应用

说明书

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种受低温和脱落酸诱导的启动子S6PDHp3及其应用。

背景技术

启动子对于一个基因的表达具有非常重要的调控作用。Qi等(2007)认为大豆PvSR2基因启动子的(-222/-188)区和(-187/-147)区是重金属胁迫响应的关键区域。Xu等(2010)发现葡萄芪合成酶基因启动子的(-162/0)区对胁迫诱导最为关键。Li等(2013)的结果也表明GPP基因启动子受不同逆境的诱导。

在植物抗逆启动子方面，现有技术进行了富有成效的研究，如中国农业科学院棉花研究所所持的中国专利201310450331.0提供了一种干旱胁迫诱导的启动子。不过，目前，在低温和脱落酸诱导启动子方面的研究还相对较少。

因此，构建一种受低温和脱落酸诱导的启动子是十分必要的。

发明内容

针对现有技术的缺点，本发明的目的之一在于提供一种受低温和脱落酸诱导的启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明的另一个目的在于提供包含上述启动子的表达载体。本发明所述的表达载体可以为任何一种可包含本发明所述启动子的表达载体，如pGWB433表达载体。

在实际利用时，举例而言，本发明所述的表达载体可以用于表达GUS基因。

本发明的另一个目的在于提供包含上述启动子的重组菌或表达盒。

本发明的所述的表达盒由所述启动子、所述启动子转录的目的基因和终止子构成。

本发明的另一个目的在于提供利用所述启动子培育转基因植物的方法，该方法包括：构建含所述启动子的表达载体并转化入植物中，得到受低温和脱落酸诱导表达的转基因植物。

举例而言，本发明所述的植物可以为蔷薇科植物(山梨醇(Sorbitol)是其糖代谢的主要形式)。

如本发明的实施例所示，所述植物可以为拟南芥。

本发明的有益效果：

本发明的启动子可以显著的提高外源基因在低温胁迫和脱落酸胁迫下的表达水平，可将其用于提高和改善植物在逆境胁迫下的生长特性和环境适应性。

附图说明

图1为本发明S6PDHp3::GUS融合表达载体的PCR检测；

图2为本发明所得转基因拟南芥的PCR检测；

图3为本发明转基因拟南芥不同部位GUS染色结果图；其中，A：叶；B：茎；C：花；D：根；

图4为本发明实施例1低温处理下转基因拟南芥中GUS活性分析；其中，GUS活性平均值源自3次独立试验；标准差标于柱型图上；单侧配对t检验用于显著性差异检测分析(*：P<0.05)；WT：野生型；

图5为本发明实施例1ABA处理下转基因拟南芥中GUS活性分析；GUS活性平均值源自3次独立试验；标准差标于柱型图上；单侧配对t检验用于显著性差异检测分析(**：P<0.01)；WT：野生型；

图6为本发明是实施例1和对比实施例1～3低温处理下转基因拟南芥中进行低温诱导时的GUS活性分析；GUS活性平均值源自3次独立试验；标准差标于柱型图上；单侧配对t检验用于显著性差异检测分析(**：P<0.01)；WT：野生型。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

1.1材料

本研究所用的拟南芥(Arabidopsis thaliana)为Columbia野生型。MUG、SDS、Tris酚、X-gal、4-MU购自Sigma公司，BP Clonase Enzyme Mix和LR Clonase Enzyme Mix均购自Invitrogen公司，其它试剂均为国产分析纯。载体pDONR221(Kan抗性)、pGWB433、农杆菌EHA105和含有苹果S6PDHp基因的载体(pMD-S6PDHp)为本实验室保存。大肠杆菌TOP10感受态购买于天根公司。

1.2 S6PDHp3::GUS融合表达载体的构建