[发明专利]用于病毒性脑炎快速诊断的多重PCR试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于病毒性脑炎快速诊断的多重PCR试剂盒，能够快速检测六种病毒性脑炎，单纯疱疹病毒1型（HSVⅠ）、单纯疱疹病毒2型（HSVⅡ）、水痘带状疱疹病毒（VZV）、EB病毒（EBV）、肠道病毒71型（EV71）及巨细胞病毒（CMV）；本发明公开的6对引物能够特异性扩增HSVⅠ、HSVⅡ、EBV、CMV、EV71、VZV，引物之间互不干扰，构建的mPCR体系敏感性达到10²~10³拷贝；针对临床疑似病毒性脑炎患者15例脑脊液标本，本mPCR体系检测检出6份阳性标本，其中HSVⅠ5例，CMV1例；本发明设计的mPCR体系具有高敏感性、特异性和稳定性及操作简单的优点，能同时快速检测6种常见病毒，有助于临床病毒性脑炎的快速诊断。

技术领域

本发明属于基因检测领域，具体设计一种用于病毒性脑炎快速诊断的多重PCR试剂盒，可检测6种常见病毒性脑炎病原体。

背景技术

多重PCR是在普通PCR的基础上，于同一个反应体系中利用多对引物同时扩增多段靶序列的PCR技术。自多重PCR报道以来，由于其高效性、灵敏性和经济简便性，已广泛应用于核酸诊断的多个领域，如遗传疾病诊断、突变和多态性分析、转基因鉴定、病原体检测等；多重PCR体系，一般包括以下试剂：PCR缓冲液、Taq酶、dNTP、MgCl₂、引物、模板和去离子水。

病毒性脑炎（Viral encephalitis，VE）是指由一种或几种病毒感染脑实质或脑膜的一种中枢神经系统疾病，四季均可发生，其发病率约为（3.5-7.4）/10万，为比较常见的中枢神经系统感染疾病，该病往往缺乏特异性临床表现，VE患者在延误治疗的情况下，71%留下持久后遗症，死亡率达到7.4%。据世界卫生组织( WHO) 估计， 全球每年约20万例VE患者，美国每年报告的VE达2万余例，而中国在这些方面的报道较少，这与我国目前病毒性脑炎的检出率低有关，同时，由于不同国家和地区VE发病率存在较大差异，因此，急需建立我国常见VE可推广应用的快速诊断方法。此外，VE的早期诊断能有效减轻脑组织损伤，降低后遗症发生率及死亡率，对疾病的治疗和预后至关重要。

引起VE的病毒包括单纯疱疹病毒（Ⅰ、Ⅱ型）、肠道病毒、风疹病毒、腮腺炎病毒、巨细胞病毒、EB病毒、水痘带状疱疹病毒、麻疹病毒等，其中肠道病毒和疱疹病毒感染率最高，分别是74.51%、15.38%。目前我国临床上VE的传统验室检测包括脑电图、影像学、病毒培养、酶联免疫吸附等方法，该类方法操作过程冗杂繁复、耗时长，难以在疾病早期做出诊断并延误治疗，同时存在特异性差、敏感性低、假阳性和假阴性高的缺点。因此，开发高敏感性的多重PCR检测技术和相应的检测试剂盒对脑膜炎的诊断、治疗及预后具有重要的价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于病毒性脑炎快速诊断的多重PCR试剂盒，用于六种常见病毒的多重PCR检测，通过设计特异性引物，结合多重PCR检测体系和条件，利用操作简单的mPCR方法可以同时或者单独快速检测单纯疱疹病毒1型（HSVⅠ）、单纯疱疹病毒2型（HSVⅡ）、水痘带状疱疹病毒（VZV）、EB病毒（EBV）、肠道病毒71型（EV71）及巨细胞病毒（CMV）这6种发病率高的VE病毒，该方法可用于临床标本的检验。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种用于病毒性脑炎快速诊断的多重PCR试剂盒，包括针对病毒性脑炎的特异性引物对； 所述针对病毒性脑炎的特异性引物对包括如下引物对中的一种或几种：

上述技术方案中，检测病毒性脑炎的多重PCR试剂盒还包括Taq 聚合酶、dNTP、MgCl₂、PCR缓冲液、去离子水。