[发明专利]一种黄酮类化合物的毛细管电泳电化学发光检测方法

权利要求书

1.一种黄酮类化合物的毛细管电泳电化学发光检测方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：

步骤1、吸取黄酮化合物标准品母液，向吸取的黄酮化合物标准品母液中添加醋酸盐缓冲液，经混合后得到溶液Ⅰ-A，用紫外分光光度计对溶液Ⅰ-A进行波谱扫描，获得对照组图Ⅰ-A；分别采用二甲胺、二乙胺、二丙胺、二丁胺、二戊胺与黄酮化合物标准品母液在醋酸盐缓冲液中反应，得到五种溶液，用紫外分光光度计波谱扫描法分别检验五溶液，并将得到结果与对照组图Ⅰ-A进行比较，判断是否发生叔胺衍生化反应，

所述步骤1具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、吸取250μL浓度为100mg/L～200mg/L的黄酮化合物标准品母液，向吸取的黄酮化合物标准品母液中添加2500μL醋酸盐缓冲液，经混合后得到溶液Ⅰ-A，用紫外分光光度计对溶液Ⅰ-A进行波谱扫描，获得对照组图Ⅰ-A；

分别取五份浓度为100mg/L～200mg/L的黄酮化合物标准品母液，且每份的量均为250μL；先向这五份黄酮化合物标准品母液中均添加2500μL醋酸盐缓冲液；再分别加入二甲胺、二乙胺、二丙胺、二丁胺、二戊胺各80μL，经振荡充分混匀后，静置3min，分别得到溶液Ⅰ-B-二甲胺，溶液Ⅰ-B-二乙胺、溶液Ⅰ-B-二丙胺、溶液Ⅰ-B-二丁胺、溶液Ⅰ-B-二戊胺；最后用紫外分光光度计分别进行波谱扫描，获得对照组图Ⅰ-B-二甲胺，图Ⅰ-B-二乙胺、图Ⅰ-B-二丙胺、图Ⅰ-B-二丁胺、图Ⅰ-B-二戊胺；

步骤1.2、将步骤1.1中获得的对照组图Ⅰ-B-二甲胺、图Ⅰ-B-二乙胺、图Ⅰ-B-二丙胺、图Ⅰ-B-二丁胺及图Ⅰ-B-二戊胺分别与对照组图Ⅰ-A与进行比较，根据吸收峰值的变化，判断是否发生了叔胺衍生化反应；

步骤2、在毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液，经循环伏安法检测，待稳定后获得电化学发光基准图，即图Ⅱ-A；分别在五个毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液，再分别加入经步骤1得到的五种溶液，分别经循环伏安法检测，待稳定后获得五种对照图，将得到的五种对照图与图Ⅱ-A进行对比，确定出电化学发光信号最强的叔胺衍生化反应试剂；

步骤3、待步骤1和步骤2完成后，制备出黄酮化合物标准品衍生化母液，并对实验条件进行优化，获得线性范围、检测限、精密度、稳定性及加样相对回收率，以完成毛细管电泳电化学发光检测。

2.根据权利要求1所述的一种黄酮类化合物的毛细管电泳电化学发光检测方法，其特征在于，所述步骤1.1中采用的醋酸盐缓冲液的浓度为0.4mol/L，pH值为4.5。

3.根据权利要求1所述的一种黄酮类化合物的毛细管电泳电化学发光检测方法，其特征在于，所述步骤2具体按照以下步骤实施：

步骤2.1、在毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液300μL，经循环伏安法检测，待稳定后获得电化学发光基准图，即图Ⅱ-A；

在毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液300μL，再加入1μL经步骤1得到的溶液Ⅰ-B-二甲胺，经循环伏安法检测，待稳定后获得图Ⅱ-B-二甲胺；

在毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液300μL，再加入1μL经步骤1得到的溶液Ⅰ-B-二乙胺，经循环伏安法检测，待稳定后获得图Ⅱ-B-二乙胺；

在毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液300μL，再加入1μL经步骤1得到的溶液Ⅰ-B-二丙胺，经循环伏安法检测，待稳定后获得图Ⅱ-B-二丙胺；

在毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液300μL，再加入1μL经步骤1得到的溶液Ⅰ-B-二丁胺，经循环伏安法检测，待稳定后获得图Ⅱ-B-二丁胺；

在毛细管电泳电化学发光检测池中加入联吡啶钌电化学发光液300μL，再加入1μL经步骤1得到的溶液Ⅰ-B-二戊胺，经循环伏安法检测，待稳定后获得图Ⅱ-B-二戊胺；

步骤2.2、将经步骤2.1得到的图Ⅱ-B-二甲胺、图Ⅱ-B-二乙胺、图Ⅱ-B-二丙胺、图Ⅱ-B-二丁胺及图Ⅱ-B-二戊胺分别与图Ⅱ-A进行比较，确定出电化学发光信号最强的叔胺衍生化反应试剂：二丙胺。