[发明专利]脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗代谢综合征药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗代谢综合征药物中的应用。

背景技术

代谢综合征是指人体的蛋白质、脂肪、碳水化合物等物质发生代谢紊乱的病理状态，是一组复杂的代谢紊乱症候群，是导致糖尿病、心脑血管疾病的危险因素。胰岛素抵抗和高血糖、高血压、血脂异常等一系列代谢综合征，是非酒精性脂肪肝病、糖尿病、动脉粥样硬化等疾病发病的“共同土壤”。由代谢综合征所致的高住院率、高致残率、高致死率已成为威胁全人类健康的公共卫生问题。

脂肪来源间充质干细胞(ADSC)存在于脂肪组织的血管基质成分(SVF)中，具有自我更新和多向分化潜能。ADSC在体外可被诱导分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等不同的组织细胞，是目前组织修复和再生领域的研究重点和热点。脂肪来源间充质干细胞外泌体可以携带具有生物学活性的蛋白质和RNA等物质等，将有效成分及信息高效传递至受体细胞，在细胞间的信息交流中起重要作用。

目前对于脂肪来源间充质干细胞的研究主要涉及在肾脏、眼底疾病中的用途(CN102048756A)、在治疗勃起功能障碍的用途(CN105902568A)、在制备肝纤维化治疗制剂的用途(CN103436555A)、在制备治疗骨性关节炎制剂的用途(CN105748519A)、在制备肝癌化疗增敏制剂中的用途(CN103451152A)等，但迄今还未有关于脂肪来源间充质干细胞及其外泌体在治疗代谢综合征方面的报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的提供脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗代谢综合征药物中的应用。

本发明研究发现，脂肪来源间充质干细胞外泌体可有效缓解胰岛素抵抗和代谢紊乱，在一定程度上抑制代谢综合征以及非酒精性脂肪肝的发生发展，由此提出了下述的发明内容：

本发明的第一方面，提供脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗代谢综合征药物中的应用。

本发明中，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体由如下方法制备而成：

(1)将剥离的脂肪组织分散于消化液中，以产生细胞悬浮液；

(2)离心细胞悬浮液，以形成细胞沉淀，分离沉淀，洗涤，得到含有脂肪来源间充质干细胞(ADSC)的血管基质成分(SVF)；

(3)在体外培养体系中对ADSC进行扩增培养，收集扩增培养后的上清液，浓缩，向浓缩后的上清液中加入外泌体提取试剂，即提取得到脂肪来源间充质干细胞外泌体。

优选的，步骤(1)中，所述消化液是由KRB缓冲液和Ⅰ型胶原酶组成；更优选的，KRB缓冲液和Ⅰ型胶原酶的组成比例为1ml：2mg。

优选的，步骤(2)中，离心转速为2000rpm，离心时间为5分钟。

优选的，步骤(3)中，扩增培养的条件为：用不含外泌体的10％胎牛血清的DMEM培养基(含有bFGF)培养ADSC。

优选的，步骤(3)中，所述外泌体提取试剂为Exoquick-TCTM外泌体提取试剂。

本发明中，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体具有TSG101、CD9、CD63和HSP90标志。

优选的，本发明中，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体来源于小鼠附睾处脂肪组织。

优选的，本发明中，所述代谢综合征为高脂饮食诱发的代谢紊乱。

本发明的第二方面，提供包含上述脂肪来源间充质干细胞外泌体的组合物在制备治疗代谢综合征药物中的应用。

本发明的第三方面，提供脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗非酒精性脂肪肝病的生物制剂中的应用。

本发明的有益效果：

本发明首次提出了脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗代谢综合征药物中的新用途，以及在制备治疗非酒精性脂肪肝病的生物制剂中的新用途。本发明研究发现，ADSC来源外泌体可有效缓解胰岛素抵抗和代谢紊乱，在一定程度上抑制代谢综合征以及非酒精性脂肪肝的发生发展。此外，本发明还提供了上述脂肪来源间充质干细胞外泌体的制备方法，操作简单可行。

附图说明

构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。

图1：脂肪来源间充质干细胞外泌体的透射电镜图；图中，白色标尺为150nm。

图2：外泌体标志western-blot的鉴定结果。

图3：ADSC来源的外泌体干预治疗后，小鼠血清中甘油三酯含量。