[发明专利]脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗脂肪组织炎症药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗脂肪组织炎症药物中的应用。

背景技术

脂肪组织局部内皮细胞、脂肪细胞以及原驻的巨噬细胞三者相互作用，影响脂肪组织的稳态和功能。肥胖可以诱发脂肪细胞肥大，使其产生并释放大量促炎细胞因子如TNF-α、IL-6、MCP-1等。这些促炎细胞因子的产生会上调内皮细胞的粘附分子、增加血管通透性，进而募集并活化大量巨噬细胞，扩大炎症反应，最终发展成为慢性脂肪组织炎症。脂肪组织中的巨噬细胞在脂肪组织炎症中起重要作用，脂肪组织中巨噬细胞的浸润活化以及大量促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-12的释放是脂肪组织炎症的主要表现。慢性脂肪组织炎症是胰岛素抵抗以及Ⅱ型糖尿病的重要始发因素。因此控制脂肪组织炎症是防治糖尿病和心血管等疾病发生发展的关键环节。

脂肪来源间充质干细胞(ADSC)存在于脂肪组织的血管基质成分(SVF)中，具有自我更新和多向分化潜能。ADSC在体外可被诱导分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和内皮细胞等不同的组织细胞，是目前组织修复和再生领域的研究重点和热点。脂肪来源间充质干细胞外泌体可以携带具有生物学活性的蛋白质和RNA等物质，将有效成分及信息高效传递至受体细胞，在细胞间的信息交流中起重要作用。

目前对于脂肪来源间充质干细胞的研究主要涉及在肾脏、眼底疾病中的用途(CN102048756A)、在治疗勃起功能障碍的用途(CN105902568A)、在制备肝纤维化治疗制剂的用途(CN103436555A)、在制备治疗骨性关节炎制剂的用途(CN105748519A)、在制备肝癌化疗增敏制剂中的用途(CN103451152A)等，但迄今还未有关于脂肪来源间充质干细胞及其外泌体在治疗脂肪组织炎症反应的报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的提供脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗脂肪组织炎症药物中的应用。

本发明研究发现，脂肪来源间充质干细胞外泌体能够抑制腹内脂肪组织巨噬细胞的浸润活化，并抑制促炎细胞因子的产生和释放，对脂肪组织炎症具有很好的抑制效果，由此提出了下述的发明内容：

本发明的第一方面，提供脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗脂肪组织炎症药物中的应用。

本发明中，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体由如下方法制备而成：

(1)将剥离的脂肪组织分散于消化液中，以产生细胞悬浮液；

(2)离心细胞悬浮液，以形成细胞沉淀，分离沉淀，洗涤，得到含有脂肪来源间充质干细胞(ADSC)的血管基质成分(SVF)；

(3)在体外培养体系中对ADSC进行扩增培养，收集扩增培养后的上清液，浓缩，向浓缩后的上清液中加入外泌体提取试剂，即提取得到脂肪来源间充质干细胞外泌体。

优选的，步骤(1)中，所述消化液是由KRB缓冲液和Ⅰ型胶原酶组成；更优选的，KRB缓冲液和Ⅰ型胶原酶的组成比例为1ml：2mg。

优选的，步骤(2)中，离心转速为2000rpm，离心时间为5分钟。

优选的，步骤(3)中，扩增培养的条件为：用不含外泌体的10％胎牛血清的DMEM培养基(含有bFGF)培养ADSC。

优选的，步骤(3)中，所述外泌体提取试剂为Exoquick-TC^TM外泌体提取试剂。

本发明中，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体具有TSG101、CD9、CD63和HSP90标志。

优选的，本发明中，所述脂肪来源间充质干细胞外泌体来源于小鼠附睾处脂肪组织。

优选的，本发明中，所述脂肪组织炎症为饮食诱导肥胖所致的慢性脂肪组织炎症。

本发明的第二方面，提供包含上述脂肪来源间充质干细胞外泌体的组合物在制备治疗脂肪组织炎症药物中的应用。

本发明的第三方面，提供脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗由巨噬细胞炎症药物中的应用。

本发明的有益效果：

本发明首次提出了脂肪来源间充质干细胞外泌体在制备治疗脂肪组织炎症药物中的新用途，以及在制备治疗巨噬细胞炎症药物中的新用途。本发明研究发现，脂肪来源间充质干细胞外泌体能够抑制腹内脂肪组织巨噬细胞的浸润活化，并抑制促炎细胞因子的产生和释放，对脂肪组织炎症具有很好的抑制效果。此外，本发明还提供了上述脂肪来源间充质干细胞外泌体的制备方法，操作简单可行。

附图说明