[发明专利]一种多重荧光PCR法联合检测呼吸道病原体的试剂盒

说明书

本发明提供一种多重荧光PCR法联合检测呼吸道病原体的试剂盒，包含6个组分：反应液A，反应液B，反应液C，酶混合液，阳性对照，阴性对照，包含常见的11种呼吸道病原体检测（甲型流感病毒通用型、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒的1/2/3型、腺病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、A族链球菌），通过3个反应缓冲液进行扩增，每个反应缓冲液包含四个荧光通道，能够排查临床上90%的病原体感染。

技术领域

本发明属于荧光定量PCR领域，具体涉及一种多重荧光PCR法联合检测呼吸道病原体的试剂盒。

背景技术

急性呼吸道感染有较高的发病率和死亡率，特别是下呼吸道感染造成极大的疾病负担，全球有20%的学龄前儿童死于下呼吸道感染（SARI），90%的死亡病例归因于肺炎。肺炎或急性肺炎是发热呼吸道症侯群的主要感染形式，也是造成儿童发病和死亡的主要原因。

1岁以内儿童肺炎发病率为0.01~0.68次/人年，5岁以内儿童肺炎发病率为0.14~0.66次/人年；肺炎死亡率在1岁以下儿童为485 /10万~890 /10万，5岁以下儿童为184 /10万~1 223 /10万。（数据来源参考“中国大陆肺炎发病率与死亡率”）。

现阶段临床上对呼吸道病原体主要通过临床症状、分离培养及免疫检测等常规手段进行诊断及病原体排查。分离培养耗时耗力，需要严格的实验室环境、通常需要3天才能确诊；而免疫检测灵敏度低，且存在“窗口期”，感染后3~7天才能检测出相应的抗原或抗体。

发明内容

本发明的目的在于提供一种多重荧光PCR法联合检测呼吸道病原体的试剂盒，主要采取多重实时荧光PCR法对呼吸道病原体进行检测。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明在一个试剂盒内包含常见的11种呼吸道病原体检测（甲型流感病毒通用型、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒的1/2/3型、腺病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、A族链球菌），通过3个反应缓冲液进行扩增，每个反应缓冲液包含四个荧光通道，能够排查临床上90%的病原体感染。

所述试剂盒包括如下；反应液A包含甲型流感特异性引物及探针、乙型流感特异性引物及探针、腺病毒特异性引物及探针、呼吸道合胞病毒特异性引物及探针；

反应液B包含肺炎支原体特异性引物及探针、肺炎衣原体特异性引物及探针、副流感病毒特异性引物及探针、内控特异性引物及探针；

反应液C包含嗜肺军团菌特异性引物及探针、肺炎链球菌特异性引物及探针、流感嗜血杆菌特异性引物及探针、A族链球菌特异性引物及探针；

酶混合液包含热启动Taq酶及M-MLV酶；

阳性对照包含特异性质粒及TE水；

阴性对照包含TE水。

引物探针序列：

试剂组分配方：